免疫印迹（WesternBlot）基本原理、实验步骤和FAQ.PDFVIP

活性蛋 白整体 方案 Active Protein Solutions 免疫印迹(Western Blot)的基本原理、实验步骤及 FAQ 查看 Western blot 实验问题 ：Western Blot 的常见问题(FAQ) Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳 ，被检测物是蛋白质 ，“探针”是抗体 ，“显色”用标记的二抗。SDS 可对蛋白质样品进行分离 ，转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜 （NC ）上。固相载体可以吸附蛋白质 ，并保 持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的 NC膜就称为一个印迹 （blot ），用蛋白溶液 （如 5%BSA 或 脱脂奶粉溶液 ）处理 ，封闭 NC膜上的疏水结合位点。用目标蛋白的抗体 （一抗 ）处理 NC膜——只有待研究的蛋 白质才能与一抗特异结合形成抗原抗体复合物 ，这样清洗除去未结合的一抗后 ，只有在目标蛋白的位置上结合着一 抗。用一抗处理过的 NC膜再用标记的二抗处理 ，二抗是指一抗的抗体 ，如一抗是从鼠中获得的 ，则