β-catenin对恶性黑色素瘤细胞A375的增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响-外科学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 背景： 恶性黑色素瘤是一种较常见的恶性肿瘤，好发于皮肤部，恶性程度高，平 均生存期约 30.3 个月，且发病率呈逐年上升趋势。目前，治疗恶性黑色素瘤主 要的手段有手术及抗肿瘤治疗（化疗、放疗、生物治疗），但其疗效均较差。于 是寻求一种新的有效治疗措施有着重要意义。近年来，发现 Wnt/β-catenin 信号 通路与多种恶性肿瘤发生发展均有密切联系，但其作用机制没有被完全认知。 现已认为，Wnt/β-catenin 信号转导通路的核心蛋白β-catenin 在细胞浆内异常聚积 是 Wnt/β-catenin 信号转导通路激活的标志。本实验利用含有β-catenin 特异序列 RNA 干扰慢病毒沉默β-catenin 蛋白的表达，以此阻断 Wnt/β-catenin 信号转导通 路，观察β-catenin 沉默对恶性黑色素瘤 A375 细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影 响。 目的： 探讨通过沉默 Wnt/β-catenin 信号通路中的关键蛋白β-catenin，观察β-catenin 对人恶性黑色素瘤 A375 细胞增殖、侵袭、迁移以及凋亡的影响，从而为恶性黑 色素瘤的治疗提供依据。 方法： 1. 制 作 干 扰 慢 病 毒 液 ： β-catenin-RNAi-LV(β-catenin 干 扰 慢 病 毒 液 ) 和 β-catenin-negative-LV (空载体慢病毒液)。分别感染人恶性黑色素瘤 A375 细胞， 得到的稳定感染细胞株分别标记为 A375-RNAi、A375-negative。采用 Western Blot 法检测感染后的 A375-RNAi、A375-negative 细胞中β-catenin 蛋白表达水平，并 以未感染的细胞作对照。 2. MTT 法分别检测 A375-RNAi、A375-negative 细胞增殖能力，并以未感染 的细胞作对照。 3. 采用细胞平板克隆形成实验检测 A375-RNAi、A375-negative 细胞平板克 隆形成能力，并以未感染的细胞作对照。 4. 采用 Transwell 法检测 A375-RNAi、A375-negative 细胞体外趋化侵袭、 II 迁移能力，并以未感染的细胞作对照。 5. 流式细胞术亚 G1 峰法检测 A375-RNAi、A375-negative 细胞的凋亡率， 并以未感染的细胞作对照。 结果： 1. Western Blot 结果显示：β-catenin 在人恶性黑色素瘤 A375 细胞中高表达， β-catenin 在 A375-RNAi 细胞中的表达量下降，A375-RNAi 细胞β-catenin 蛋白的 表 达 量 较 未 感 染 的 A375 细 胞 下 降 约 55.1% （ P0.05 ）， 证 实 β-catenin 被 β-catenin-RNAi-LV 有效沉默；A375-negative 细胞内β-catenin 蛋白表达量与 A375 细胞无明显差异（P0.05）。 2. MTT 结果显示：A375-RNAi 细胞与 A375-negative 细胞、A375 细胞相比 增殖活性均降低(P＜0.05)；A375-negative 细胞较 A375 细胞增殖活性无明显差异 （P＞0.05）。 3. 细胞平板克隆实验检测结果：A375-RNAi 细胞与 A375-negative 细胞、 A375 细胞平板克隆形成能力相比均减低(P＜0.05)；A375-negative 细胞较 A375 细胞平板克隆形成能力无明显差异（P＞0.05）。 4. Transwell 结果显示：A375-RNAi 细胞与 A375-negative 细胞、A375 细胞 侵袭、迁移能力相比均显著下降(P＜0.05)，A375-negative 细胞较 A375 细胞的侵 袭、迁移能力无明显差异（P＞0.05）。 5. 流式细胞术结果显示：A375-RNAi 细胞与 A375-negative 细胞、A375 细 胞相比凋亡率明显增高 (P＜0.05)；A375-negative 细胞较 A375 细胞凋亡率无显 著差异性(P＞0.05)。 结论： 1. 慢病毒载体介导 siRNA 能有效沉默人黑色素细胞瘤 A375 细胞内β-catenin 蛋白的表达。 2. 下调β-catenin 表达能使人黑色素细胞瘤 A375 细胞增殖变缓，细胞克隆形 成能力减弱，细胞侵袭、迁移能力下降，细胞凋亡率增加。β-catenin 有望成为治 疗人恶性黑色素瘤有效靶点。 关键词：恶性黑色素瘤；β-catenin；siRNA；增殖；侵袭；迁移；凋亡 III Ab Abstract ABSTRACT Backgroun