β1整合素反义寡核苷酸联合顺铂对卵巢癌体外侵袭性的影响-肿瘤学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 β1 整合素反义寡核苷酸联合顺铂对卵巢癌体外 侵袭性的影响 中文摘要 目的: 观察 β1 整合素表达下调对卵巢癌细胞生长，侵袭及对化疗药物敏感性 的影响，研究 β1 整合素反义寡核苷酸联合顺铂对卵巢癌细胞增殖与侵袭的作用， 探讨 β1 整合素作为肿瘤基因治疗一个新的靶点的可行性。 方法：体外培养人卵巢癌 SKOV3 细胞，预实验 1.优化反义复合物，倒置荧 光显微镜筛选最佳转染效果组。2.不同浓度 β1 整合素 ASODN 转染 SKOV3 细 胞， MTT 法确定最佳实验浓度。3.不同浓度 DDP 作用细胞，MTT 法确定最佳 实验浓度。实验：取对数生长期 SKOV3 细胞，分组：细胞对照组(不行药物处 理)，正义链组(转染 β1 integrin SODN)，反义链组(转染 β1 integrin ASODN)，DDP 组(DDP 作用)，反义链+ DDP 组(转染 β1 integrin ASODN 24 小时后 10mg/l DDP 作用 24 小时)。进行以下实验：1.倒置光学显微镜(100×)观察各组细胞形态学改 变；2.应用 MTT 法检测各组细胞生长抑制率；3. Transwell 侵袭小室建立肿瘤细 胞侵袭模型(铺 Matrigel 基质胶)，计算各组细胞穿膜数，评价侵袭能力改变；4. 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 β1 整合素 mRNA 表达在各组间的差异。 实验：取对数生长期 SKOV3 细胞，分组：单纯化疗组(不行转染)，正义链+化 疗组(转染 β1 integrin SODN)，反义链+化疗组(转染 β1 integrin ASODN)，培养 24 小时后，分别加入不同浓度的 DDP 作用 24 小时，MTT 法检测各组细胞生长抑 制率，Logit 法计算 IC50 (半数抑制浓度)，观察 ASODN 对化疗药物敏感性的影 响。 结果：β1 integrin ASODN 和 DDP 对 SKOV3 细胞都具有一定程度的凋亡诱导 作用，取 β1 integrin ASODN 单一治疗最适宜浓度为 400nmol/l， 细胞凋亡率达 (65.10±5.659)%，取 DDP 最适宜浓度为 10mg/l，细胞凋亡率为(39.20±4.1010%。 β1 整合素反义寡核苷酸可以下调 β1 integrin mRNA 的表达，其水平下降到 (47.53±0.4)%，明显抑制卵巢癌细胞增殖，生长抑制率可达(50.60±2.26)%，可以 降低卵巢癌细胞侵袭能力，平均穿膜数降为(28.40±2.31)个/200 倍视野，与 DDP 合用可以降低化疗药物的 IC50，由(15.27±0.45) mg/l 降为(7.8±0.68)mg/l，数据与 对照组相比，具明显差异性，统计学处理结果， P＜0.05，对细胞形态改变明显 并促使其凋亡。β1 integrin ASODN 联合 DDP 治疗组对卵巢癌细胞抑制率达 (61.60±0.85)%，对 β1 integrin mRNA 表达的抑制率为(32.29±3.17)%，细胞穿膜数 平均为(17.00±1.58)个/200 倍视野，与对照组、SODN 组、DDP 和 ASODN 组相 比较，均具有显著差异(P＜0.05)。 结论：β1 整合素反义寡核苷酸有效抑制了卵巢癌的细胞增殖，验证了 β1 整 合素可以增强卵巢癌的恶性增殖能力。通过反义寡核苷酸下调 β1 integrin 的表 达，显著增强了卵巢癌对顺铂的敏感性，提示 β1 integrin 高表达是卵巢癌对顺铂 不敏感的重要因素，抑制基因表达可以提高临床治疗效果。β1 integrin ASODN 可以明显降低卵巢癌的侵袭能力，效果强于传统化疗药顺铂，体外实验模拟了 β1 整合素可以介导卵巢癌的浸润转移，为针对性的基因治疗提供可靠工具。反义寡 核苷酸经阳离子脂质体介导法可特异性封闭靶基因，具低毒性不易耐药等特点， 优于现有化疗药物，与后者合用可以减少后者用量从而减轻不可逆转的毒副作 用，且本身具有抗肿瘤功效，应用前景广阔。 关键词：β1 整合素；反义寡核苷酸；增殖；细胞侵袭；顺铂；化疗敏感 Impact on the invasion of β1 integrin antisense oligonucleotide in combination with cisplatin in vitro of ovarian cancer Abstract Objective: To investigate the effects of the β1 integrin antisense oligodeoxyn- ucleotides (ASODN) on cell g