α-Actinins对足细胞运动性的影响机制-内科学;肾脏病专业论文.docxVIP

目 录 一 . 前言………………………………………………………………………………1 二 . 摘要 1 . 中文摘要…………………………………………………………………………… 6 2 . 英文摘要…………………………………………………………………………… 9 三． 正文 第一部分 α-Actinins 在足细胞骨架结构，运动性和牵拉力中的作用 1.正文……………………………………………………………………………………12 2.附图……………………………………………………………………………………29 第二部分 α-Actinins 基因敲低或突变对足细胞黏着斑的影响 1.正文……………………………………………………………………………………35 2.附图……………………………………………………………………………………43 第三部分 α-Actinins 基因敲低或突变对小 GTP 酶活性的影响 1.正文……………………………………………………………………………………47 2.附图……………………………………………………………………………………56 四． 综述 肌动蛋白细胞骨架在足细胞病中的作用机制与治疗…………………………………60 五． 附录 中英文缩略词表…………………………………………………………………………77 攻读学位期间发表的文章………………………………………………………………78 六． 致谢………………………………………………………………………………80 华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE PAGE 1 前言 足细胞是高度特异性的终末分化细胞，其足突相互交错覆盖于肾小球基底膜 (glomerular basement membrane，GBM) 外层，构成肾脏滤过屏障最终也是最重要的 一层 HYPERLINK \l _bookmark0 [1]。足细胞的功能很大程度上依赖于其复杂的细胞结构，特别是维持其正常足突 结构的高度有序的平行收缩肌动蛋白纤维束 HYPERLINK \l _bookmark1 [2]。在蛋白尿性肾脏疾病的范畴内，对肌 动蛋白细胞骨架及其相关蛋白的研究是非常必要的，因为足细胞肌动蛋白细胞骨架功 能失调与疾病表型密切相关。 肌动蛋白细胞骨架是调控细胞形态，细胞黏附和运动性的基本结构和功能元素。 肌动蛋白细胞骨架的聚集，维持与解聚都是由一系列肌动蛋白相关蛋白的各种不同分 子间的相互作用而成的 HYPERLINK \l _bookmark2 [3]。因此，调节或稳定肌动蛋白细胞骨架的相关蛋白对于维持 正常的肾小球滤过功能至关重要。近年来，肌动蛋白细胞骨架对于维持足细胞正常结 构和功能的精确组织与调控机制也越来越清楚 HYPERLINK \l _bookmark3 [4]。几种人类遗传性疾病和转基因小鼠 模型的研究结论揭示几种足细胞蛋白发生突变可导致滤过屏障破坏和肌动蛋白细胞 骨架重排 HYPERLINK \l _bookmark4 [5, HYPERLINK \l _bookmark5 6]， 如 α-actinin-4 HYPERLINK \l _bookmark6 [7]， CD2-associated protein (CD2AP) HYPERLINK \l _bookmark7 [8]和 myosin HYPERLINK \l _bookmark8 [9] 等。 足突的收缩系统（actin, α-actinin 和 myosin）和微管系统通过一些连接蛋白（vinculin, talin 和 integrins）与 GBM 中的Ⅳ型胶原蛋白，纤连蛋白和层连蛋白相连接，来形成 稳定的黏着斑而抵消 GBM 的张力 HYPERLINK \l _bookmark9 [10]。这些收缩蛋白可能有助于足细胞通过强直性收 缩来支撑肾小球毛细血管壁的结构。一些影响它们功能的因素就可能损伤肾小球结构 的完整性，最终导致肾小球损伤。因此，探讨细胞骨架相关蛋白引起肾小球疾病的机 制将对理解人类肾小球疾病的发生与进展有很重要的意义。 α-Actinins 是一类结合和交联肌动蛋白的蛋白家族。已知人类有四种 α-actinin 基 因（ACTN1-4），它们有着广泛的同源性，存在一系列保守的功能域，包括 N 末端的 肌动蛋白结合区，四个血影蛋白样的重复序列构成的中间区和 C 末端两个 EF 样的模 序 HYPERLINK \l _bookmark10 [11, HYPERLINK \l _bookmark11 12]。ACTN2 和 ACTN3 在骨骼肌和心肌肌小节中高度表达，ACTN1 和 ACTN4 在非肌肉细胞中广泛表达 HYPERLINK \l _boo