β淀粉样蛋白及小胶质细胞神经元毒性作用的体外研究-神经病学专业论文.docx

化学去细胞神经同种异体移植的临床前及初步临床应用研究 化学去细胞神经同种异体移植的临床前及初步临床应用研究 附图 附 图 图l-l 同种异体神经移植后2w在移植神经及其周围的cD3+T细胞浸润。A：新 鲜同种异体神经移植；B：化学去细胞同种异体神经移植。(免疫组化染色×400) 图l-2同种异体神经移植后2w在移植神经及其周围的cD4+T细胞浸润。A：新鲜 同种异体神经移植；B：化学去细胞同种异体神经移植。(免疫组化染色×400) 图l_3同种异体神经移植后2w在移植神经及其周围的CD8+T细胞浸润。A：新鲜 同种异体神经移植；B：化学去细胞同种异体神经移植。(免疫组化染色×400) -‘76． 解放军总医院，军医进修学院博士学位论文 解放军总医院，军医进修学院博士学位论文 中文摘要 B一淀粉样蛋白及小胶质细胞神经元毒性作用的体外研究 摘要 研究目的： 对B淀粉样蛋白的神经元毒性作用、B淀粉样蛋白活化诱导小胶质细胞分 泌炎性细胞因子和自由基一氧化氮的作用进行研究，探讨B淀粉样蛋白及活化 后小胶质细胞的神经元毒性作用机制，并对非甾体类抗炎药吲哚美辛的神经元 保护作用进行初步研究，为阿尔茨海默病的炎性反应机制及抗炎治疗提供体外 依据。 研究方法： 1．应用神经生长因子(NGF)分化的Pcl2细胞作为体外神经元模型，高度 纯化的BV一2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，观察加入A B后细胞形态 学及细胞活性改变。 2．RT—PcR法观察IL—l 0对神经元APP mRNA及A B对Bv一2细胞IL一1 0、 iN0s mRNA表达的影响；放射免疫法测定加入A 0后BV一2细胞上清I卜l B及 IL一6水平；测定加入A0后BV一2细胞上清NO含量及细胞iN0s酶活力；western blot法、流式细胞仪间接免疫荧光标记法测定A B对BV一2细胞iNos蛋白表达 的影响，并应用免疫细胞化学方法对iNOs蛋白的表达情况进行观察。 3．观察非甾体类抗炎药吲哚美辛的神经元保护作用、对神经元APP mRNA 表达及小胶质细胞表达、分泌IL一1 B和NO的拮抗作用。 结果： 1．在体外AB卜42和AB 25～35对神经元有类似的细胞毒性作用，随着浓 度的增加、作用时间的延长该毒性作用也随之增加，并且与聚集状态相关。 2 解放军总医院／军医进修学院博士学位论文 解放军总医院／军医进修学院博士学位论文 中文摘要 2．IL一1 B不仅可以扩大AB的细胞毒性作用，还以时间及剂量依赖方式 刺激神经元APP mRNA表达增加。 3．A B对Bv一2细胞的生存活性没有影响，在较低浓度时A B卜42就可以 使BV一2细胞形态发生变化，与孵育状态有关。A 0 25—35无此作用。 4．AB卜42及AB 25—35均可使Bv一2细胞释放IL～l B增加，并在mRNA水 平以时间及剂量依赖方式进行调控。与A B聚集状态无关。 5．A B卜42可以刺激BV一2细胞产生大量NO、提高Bv一2细胞iNOs酶活性、 增加iNOs mRNA以及蛋白质表达，均具有时间及剂量依赖性。A B z5—35无上 述作用。 6．吲哚美辛可部分抑制A B的毒性作用；下调IL—l B对Pcl2细胞APP基 因表达的调节作用；在mRNA及蛋白质水平抑制BV一2细胞对IL一1 B及NO的表 达及分泌，阻断炎症级联放大机制，从而起到神经元保护作用。 结论： 1．A B在体外具有直接神经元毒性作用；并可通过活化小胶质细胞，增加 炎性细胞因子及自由基NO的表达及分泌，为介导炎性级联反应、进一步 解放军总医院／军医进修学院博士学位论文 解放军总医院／军医进修学院博士学位论文 中文摘要 用机制进行研究，为AD炎性反应的相关性及抗炎治疗的有效性进一步提供了 体外依据。 2．发现在体外低浓度A B即可激活BV一2细胞，使之形态学发生改变；在 浓度增加后可使之分泌炎性细胞因子以及自由基NO，与传统认为的小胶质细 胞激活反应形式不完全一致。 3．发现除抑制环氧合酶(cOx)外，非甾体类抗炎药吲哚美辛还可通过抑 制小胶质细胞合成及分泌炎性细胞因子以及NO来起到神经元保护作用。 4．在国内首 解放军总医院，军医进修学院博士学位论文 解放军总医院，军医进修学院博士学位论文 英文摘要 Neuroto姬city Effect of B·Amyloid and Microglia砌WfrD Abstract 【objectiV鹤】Tb obserVe the effect of the in：Flammatory interleuhne—lp(【L—lp) on the cy￡otoxity of Ap an