临床医学检验新技术教案.docVIP

荧光定量PCR 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 技术原理：将标记有 HYPERLINK /view/2062542.htm \t _blank 荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守 HYPERLINK /view/95003.htm \t _blank 聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得CT值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。 临床应用：各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价；地中海贫血、血友病、 HYPERLINK /view/3388887.htm \t _blank 性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。检测种类涉及多种病原体，从细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体、螺旋体到寄生虫。 流式细胞术 流式细胞术（FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 技术原理：将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，后者与入射的激光束垂直相交，液柱中的细胞被激光激发产生荧光。仪器中一系列光学系统（透镜、光阑、滤片和检测器等）收集荧光、光散射、光吸收或细胞电组抗等信号，计算机系统进行收集、储存、显示并分析被测定的各种信号，对各种指标做出统计分析。 临床应用：可用于白血病的分型、肿瘤 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞染色体的异倍性测定，以及 HYPERLINK /view/71799.htm \t _blank 免疫学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别和 HYPERLINK /view/9070.htm \t _blank 艾滋病感染者T4、T8细胞的记数。 FCM通过荧光 HYPERLINK /view/20489.htm \t _blank 抗原抗体检测技术对 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞表面抗原分析，进行 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞分类和亚群分析。这一技术对于人体 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞免疫功能的评估以及各种血液病及肿瘤的诊断和治疗有重要作用。目前FCM用的各种单克隆抗体试剂已经发展到了百余种，可以对各种血 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞和组织细胞的表型进行测定分析。 在血液病诊断和治疗中的应用 FCM通过对外周血 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞或 HYPERLINK /view/9186.htm \t _blank 骨髓 HYPERLINK /view/3687.htm \t _blank 细胞表面 HYPERLINK /view/20489.htm \t _blank 抗原和DNA的检测分析，对白血病等各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着举足轻重的作用。 在血栓与出血性疾病中的应用 FCM可以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62，CD63等)监测血小板功能及活化情况，有利于血栓栓塞性疾病的诊断和治疗。而用FCM测定钙离子浓度，可以作为活化血小板监测的非免疫性指标。 FCM可以测定血小板相关抗体含量，用于诊断及治疗监测，具有检测速度快、灵敏度高的优点。 酶联免疫分析技术 酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术自20 世纪70年代初问世以来，发展非常迅速，目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。 技术原理：酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术，其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。测定时，将待检样本和酶标