活血丹嫩茎无性系建立研究.docVIP

活血丹嫩茎无性系建立研究 　　摘要：为满足人们栽培活血丹对种苗的需求，以活血丹嫩茎为材料，进行了愈伤组织诱导、分化，试管苗的生根、扦插和移植的研究，成功地建立起活血丹嫩茎的无性系。结果证明：MS＋BA1mg?L－1＋CH10mg?L－1÷2，4－D2.0－2.5mg?L－1是嫩茎愈伤组织诱导培养的理想培养基；Ms＋BA0.8mg?L－1＋NAA0.1mg?L－1＋AgNO30.2mg?L－1是嫩茎愈伤组织分化培养的理想培养；1/2MS＋BA0.8mg?L－1＋NAA0.1mg?L－1＋GA30.4rag?L－1是不定芽继代分化培养的理想培养基；Ms＋IBA0.6mg?L－1＋NAA0.1mg?L－1是生根培养的理想培养基。通过不定芽继代分化培养年繁殖量可达4.19.1个。移植到山林下的试管苗保持了野生活血丹的各种生物性状，且生长旺盛，当年开花结果。 　　关键词：活血丹；无性系；培养基 　　 　　活血丹(Glechoma longituta)又称佛耳草、金线草、遍地香、地钱儿等，属于唇形科活血丹属多年生草本植物。生长于林缘、林下、路旁、溪边和山坡等环境中，在我国除了青海、西藏、新疆和甘肃等地区外，其它地区均有分布。活血丹的茎叶含有左旋松樟酮、左旋薄荷酮、胡薄荷酮等成分，具有清热解毒、散瘀消肿等功效，能治风湿性关节炎、跌打损伤、风寒咳嗽、牙疼、蛇咬、疥疮等疾病。由于活血丹具有多种药用价值，多年来人们总在采集药用。近年来在辽宁南部地区，人们将其采集晒干粉碎后，作为养猪、养鸡的饲料添加剂，对预防疾病产生了明显效果。为此，养殖人大的采集活血丹作为野生饲料添加剂，从而导致野生的活血丹迅速减少而难以采到。为满足人们的需要，近年来有人试图对活血丹进行人工种植。但是，由于人们的大量采集不仅使其难以形成种子，而且可采挖的野生植株也极为有限，从而极大地限制了活血丹的人工栽培。为了满足人们栽培活血丹对种苗的需求，我们对其进行了嫩茎无性系建立的研究。虽然目前已有活血丹组织培养研究的报道，但迄今未见活血丹嫩茎无性系建立研究的报道。 　　 　　1、试材与方法 　　 　　1.1材料来源及灭菌方法 　　上一年的秋天，将大连旅顺英歌石山坡上的生长非常旺盛的活血丹做好标记，当年的5月上旬，植株高10cm左右时，将地上部分采回实验室后，剪成长4cm的嫩茎段，放入250mL的磨口广口瓶中进行灭菌。灭菌方法参见王宇等关于虎杖的研究。 　　1.2培养条件 　　培养条件参见王宇等对虎杖的研究。 　　1.3试验方法 　　1.3.1不同生长素对嫩茎愈伤组织诱导的影响试验。将无茎段菌切成长0.2－0.3cm、无生长点的嫩茎段，接种于附加不同浓度NAA、2，4－D的MS＋BA1mg?L－1＋CH10mg?L－1的培养基上进行愈伤组织的诱导培养。培养到50天时统计愈伤组织的诱导率和长势。试验重复了3次，每种培养基接种100个材料。 　　1.3.2不同基本培养基对愈伤组织分化培养的影响试验。把以上由嫩茎诱导培养的愈伤组织切成直径为0.15cm左右的块状后，接种到附加BA0.8mg?L－1＋NAA0.1mg?L－1＋AgNO30.2mg?L－1的MS、1/2MS、1/3MS、1/4MS、B5和N6六种培养基上，进行愈伤组织的分化培养。分化培养试验重复了4次，每种培养基接种100个材料。 　　1.3.3不定芽的继代分化培养试验。将以上分化培养的不定芽从基部切下后，再切成具有2个生长点的不定芽段，接种以1/2MS＋BA0.8mg?L－1＋NAA0.1mg?L－1＋GA30.4mg?L－1的培养基上，进行不定芽的分化继代培养。不定芽的分化继代培养试验重复了3次，每次重复继代培养6代，每种处理接种100个材料。 　　1.3.4不同培养基对生根培养的影响试验。将上述继代分化培养的不定芽从基部切下后，接种到不同的培养基中，进行生根培养。生根培养试验重复了3次，每次重复试验接种培养200个材料。 　　1.3.5不同移栽基质对移栽的影响试验。把在4号培养基上培养的试管苗用镊子取出，用20℃左右的清水洗去根部的培养基，移栽到上面分别铺着一层约6cm厚的山皮土、园土、河沙和炉灰渣的温室苗床上。移栽后前13天保持湿度95％左右、温度17－28℃、没有直射光的环境条件。试管苗移栽进行了3次试验，每次试验分别移栽或扦插500个材料。 　　 　　2、结果与分析 　　2.1不同生长素对嫩茎愈伤组织诱导的影响 　　培养到50天时观察统计，结果见表1。由表2说明，在不加NAA或2,4－D的培养基上，所培养的嫩茎段不能诱导形成愈伤组织；在附加不同浓度NAA或2，4－D的培养基上，都能不同程度的诱导形成愈伤组织，但其生长素的种类不同、浓度不同，愈伤组织的诱导效果不同。其中在2，4－