不同化合物对鲤卵母细胞最终成熟相关基因表达 的影响-水生生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 集 美 集 美 大 学 硕 士 学 位 论 文 不同化合物对鲤卵母细胞最终成熟相关基因表达的影响 史 艳 艳 学术诚信声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取 得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此 论文产生的权利和责任。 声明人（签名）： 时 间： 保护知识产权声明 本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以 用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 作 者（签名）： 导 师（签名）： 时 间： 不同化合物对鲤卵母细胞最终成熟相关基因表达的影响 摘 要 卵母细胞发育调控是鱼类生殖生理学的重要核心内容。卵成活率的高低一直是评价水 产养殖业的一个主要的客观因素，而卵母细胞最终成熟是卵子排出、成功受精的关键步骤。 本研究采用卵母细胞体外培养实验和荧光实时定量 PCR 技术对鲤鱼卵母细胞最终成熟分 子机制及相关内分泌干扰物对鲤鱼卵母细胞最终成熟过程影响的分子机制进行了研究。 主要结果如下： 1. 分析了在不同化合物培养下卵母细胞发生 GVBD 的情况。结果表明，DHP 可直接 促进鲤鱼卵母细胞的最终成熟；DES 可能为 DHP 类似物，与 DHP 有着相似的作用，同样 可直接促进鲤鱼卵母细胞的最终成熟；DEHP 在单独作用时，对鲤鱼卵母细胞成熟有一定 的抑制作用或没有作用，但在加入 DHP 后，该抑制作用被很大的削弱。 2. 运用 Bestkeeper、geNorm、NormFinder、RefFinder 等软件筛选了不同化合物暴露下 卵母细胞最终成熟过程中表达最稳定的内参基因。结果表明，EF1α 是 DHP 和 DES 诱导卵 母细胞最终成熟过程中表达最稳定的基因；gapdh 是 DEHP 诱导卵母细胞最终成熟过程中 表达最稳定的基因。经各候选内参基因分析 LHR 基因在 DHP 诱导卵母细胞最终成熟过程 中的表达情况表明，在特定试验条件下，最佳内参的筛选对于准确分析目的基因表达非常 重要。 3. 研究了 DHP、DES 和 DEHP 对鲤鱼卵母细胞最终成熟过程中涉及的一些相关基因 表达的影响。1）cyp19、mPRγ、LHR、cdc2 和 cyclin B 基因随着 DHP 诱导时间的延长， 表达量显著增加。20β-HSD 基因在整个 DHP 诱导过程中表达量都很低，IGFBP2 基因表达 量则随着诱导时间的延长表现为先增加后减少。2）在不同浓度 DES 诱导卵母细胞最终成 熟过程中，0.1μmol/L DES 除对 cdc2 和 cyclin B 基因表达无促进作用，对其它几个基因都 有促进作用。1μmol/L DES 显著诱导 cyp19、LHR、mPRγ、cdc2、cyclin B 和 IGFBP2 基因 的表达。2μmol/L DES 可促进 mPRγ、LHR、cyp19 和 IGFBP2 的表达。3）在不同浓度 DEHP 诱导卵母细胞最终成熟过程中，先加不同浓度 DEHP，4h 后加 DHP 培养时，DEHP 单独作 用对所有基因都有抑制作用，DEHP 浓度越高，该抑制作用越强，而在 4h 加入 DHP 后， 这种抑制作用被减弱，转而由 DHP 作为主导；DEHP 和 DHP 共同存在时，DEHP 对这些 基因的抑制作用会相对减弱。 4. 论文分析了 DHP、DES 和 DEHP 影响鲤鱼卵母细胞最终成熟过程中一些基因的共 表达关系。发现 20β-HSD、mPRγ 和 LHR 三个基因共表达；mPRγ、cdc2 和 cyclin B 三个 基因也显著共表达。上述基因的共表达关系与这些基因在卵母细胞最终成熟中的功能是密 切相关的。 I 关键词 卵母细胞最终成熟，内参筛选，鲤鱼，17α,20β-双羟基-4-孕烯，乙烯雌酚，邻 苯二甲酸二(2-乙基己)酯 II Effects of chemicals on several genes involed in final oocyte maturation of common carp (Cyprinus Carpio) Abstract Regulation of oocyte development is always the focusof fish reproduction physiology. The survival rate of eggs has been a main evaluating factor in aquaculture, and final o