不同化感物质作用下五爪金龙的生理生化反应及蛋白质组学研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

汕头 汕头大学硕士学位论文 PAGE PAGE VI 摘 要 本文利用4种单体化感物质，分别为茶碱、香草酸、（Z）-2-(2,3-二甲氧基苯基亚甲 基)-6-羟基苯并呋喃-3（2H）-酮（编号081110）和（Z）-2-(3-吡啶基亚甲基)-4,6-二甲 氧基苯并呋喃-3（2H）-酮（编号090710）处理粤东及整个华南地区危害最为严重的入侵 杂草之一的五爪金龙（Ipomoea cairica（Linn.）Sweet），以保护酶系统的变化为指标 之一，同时分别提取经 4 种化感物质处理 1 天后的五爪金龙叶片和根尖的总蛋白质，进 行二维电泳，以蛋白质斑点变化情况为另一指标，观察这4种化感物质是否能有效影响五 爪金龙的这两个指标，同时观察不同化感物质对五爪金龙的根尖和叶片的蛋白质影响是否 有一定的规律性，为筛选出对五爪金龙具专一性或高效性的化感物质，使我们的研究结果 距实际应用更进一步，为植物源除草剂的开发奠定基础。 本研究通过对不同化感物质作用下对五爪金龙的叶绿素含量、超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、以及丙二醛（MDA）含量进行测定，并进一步利 用二维电泳技术对五爪金龙在 4 种化感物质的作用下蛋白质的变化进行研究,试验结果显 示，在设定化感物质的浓度为 2mmol·L-1 时，五爪金龙的叶绿素含量在培养初期变化不明 显，随着培养时间的延长与对照相比各处理组叶片均明显变黄；其中经 081110 处理的五 爪金龙叶片边缘在第培养 7 天后出现黑斑。通过测定处理组五爪金龙的保护酶系结果显示 除 090710 外，其余三种化感物质对五爪金龙有一定的影响，表现为 SOD、CAT 都呈现先上 升后下降的趋势；POD 活性除香草酸呈现先下降后上升外其余都呈现先上升后下降趋势； 丙二醛含量除 090710 呈现持续下降外，其余三种化感物质均呈现持续上升趋势。 对五爪金龙根和叶片的蛋白提取方法，二维电泳条件进行了优化。结果表明：称取 0.08g 新鲜根尖组织，加入 1.6ml 提取液【10%的三氯乙酸（TCA）溶解于丙酮溶液并含有 0.07% 的β巯基乙醇】等电聚焦【pH（3-10）梯度胶条（11cm）二维电泳银染】的合适的蛋白质 上样浓度 40μg；等点聚焦条件为 30000V?h 时，2-DE 图谱蛋白质点多且清晰。且四种化 感物质对五爪金龙的叶片和根尖的蛋白质组都有明显的影响，其中利用香草酸对五爪金龙 叶片进行处理，通过肉眼观察可得到 31 个明显发生变化的斑点，其中新增斑点 1 个，上 调斑点 21 个，下调斑点 9 个；根尖处理可得到 22 个明显发生变化的斑点，其中新增斑点 2 个，缺失斑点 1 个，上调斑点 18 个，下调斑点 1 个。利用茶碱对五爪金龙叶片进行处理， 通过肉眼观察可得到 27 个明显发生变化的斑点，其中新增斑点 5 个，上调斑点 19 个，下 调斑点 3 个；根尖处理可得到 16 个明显的斑点，其中新增斑点 12 个，下调斑点 4 个。利 用（Z）-2-(2,3-二甲氧基苯基亚甲基)-6-羟基苯并呋喃-3（2H）-酮（编号 081110）对五 爪金龙叶片进行处理，通过肉眼观察可得到 29 个发生明显变化的斑点，其中缺失斑点 7 个，上调斑点 4 个，下调斑点 18 个；根尖处理可得到 31 个明显的斑点，其中新增斑点 5 个，上调斑点 10 个，下调斑点 16 个。利用（Z）-2-(3-吡啶基亚甲基)-4,6-二甲氧基苯 并呋喃-3（2H）-酮（编号 090710）对五爪金龙叶片进行处理，通过肉眼观察可得到 33 个 发生明显变化的斑点，其中缺失的斑点有 8 个，上调斑点 6 个，下调斑点 19 个；根尖处 理可得到 30 个明显变化的斑点，其中新增斑点 9 个，上调斑点 18 个，下调斑点 3 个。比 较不同化感物质对五爪金龙的根尖和叶片的蛋白质的想是否具有一定的规律性，结果发 现，经 090710 处理的五爪金龙，主要影响其信号转动系统；经茶碱和香草酸处理的五爪 金龙，主要影响其能量系统和抗氧化系统；经 081110 处理的五爪金龙其规律性不详，有 待于进一步研究。其中这些蛋白的功能涉及光合作用、抗氧化、能量代谢、信号转导以及 基因转录有关。其中最主要的蛋白有：细胞色素合成酶、以柠檬酸脱氢酶、ATP 合成酶亚 基、内含子编码蛋因子、谷氨酸受体、核糖体蛋白 S11、这些蛋白质与植物适应胁迫环境 均有关系。 结果表明： 1. 4 种化感物质中除 090710 对五爪金龙保护酶系统不敏感外，其他三种化感物质都 有一定的影响。 2．总蛋白的提取方法优化结果为：以 TCA-丙酮法提取五爪金龙根尖和叶片的总蛋白 质的效果最佳。 3．二维电泳条件的优化结果：新鲜组织 0