小麦胚芽ACP的提取纯化22.pptVIP

小麦胚芽中酸性磷酸酶的分离纯化 临床生物化学教研室 酶分离纯化的过程 选择原料 组织及细胞破碎 酶的抽提 酶的纯化 常用的酶分离纯化方法 盐析法 有机溶剂沉淀法 离心法 电泳法 层析法 吸附法 透析法 一、实验目的 掌握小麦胚芽中分离纯化ACP的原理 熟悉小麦胚芽中分离纯化ACP的操作过程 了解常用的酶分离纯化技术 二、实验原理 酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP) 广泛分布于自然界中，存在植物种子、霉菌、以及动物肝脏和前列腺中。 植物种子中的ACP在发芽时含量会猛增，随芽胚的生长ACP含量会下降。选用新鲜小麦胚芽作为原料来分离和纯化ACP，具有来源方便、酶含量高等优点。 二、实验原理 ACP能溶解于水和稀缓冲液中； 溶于35%饱和度的硫酸铵溶液中，在57%饱和度的硫酸铵溶液中可沉淀析出； pH小于6.5时稳定性增加，乙酸和枸橼酸可增加ACP溶液的稳定性； 在中性及高温条件下不稳定，在70℃时相对稳定； Mn2+、Mg2+为ACP激活剂，而Cu2+、Pi、Hg2+、Zn2+、Ag+、Pb2+、NaF、草酸盐、酒石酸盐和甲醛等是ACP的抑制剂。 三、实验试剂 1mol/L MnCl2溶液 饱和(NH4)2SO4 溶液(pH 5.5，4℃) 按76.7g (NH4)2SO4，加蒸馏水溶解至100ml 0.25 mol/L EDTA钠盐溶液(pH 5.7)