弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl6基因重排临床病理意义.docVIP

弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl6基因重排临床病理意义 　　【摘要】 研究弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)生发中心组（GCB）和非生发中心组(non-GCB)的bcl-6基因重排、Bcl-6蛋白表达之间无直接相关性，在DLBCL的发病机制中作用各异。 　　【关键词】 淋巴瘤；bcl-6基因重排；荧光原位杂交；免疫组化；组织微阵列 　　 　　DLBCL是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)中最为常见的组织学类型,在欧美和日本占成人NHL的30%～40%[1]。许多NHL有特征性的染色体异常，这些异常能帮助辅助诊断疾病并与其它疾病鉴别。如滤泡性淋巴瘤有t(14;18)，影响bcl-2基因；伯基特淋巴瘤有t(8;14)，影响c-myc基因；位于3q27的bcl-6基因的重排，通常见于DLBCL[2]。bcl-6基因由于在DLBCL中涉及3q27染色体易位而得以克隆，也称LAZ3或bcl-5基因，研究表明，正常bcl-6基因组全长26kb，具有l0个外显子，它编码一个含有706个氨基酸残基的蛋白质，分子量为92-98kd，属于一种转录抑制因子[3]。 　　1 实验材料和方法 　　1.1 材料 选取彭泽县人民医院病理科DLBCL存档蜡块53例，经2位副主任医师重新阅片，明确诊断并排除可能由惰性淋巴瘤转化为DLBCL的病例。存档蜡块全部重新制作HE切片，参照2008年WHO关于淋巴造血组织肿瘤分类标准，由两位副主任医师对其组织学和免疫表型进行回顾性分析并确诊。另选淋巴结反应性增生标本20例做对照组。 　　1.2 方法 　　1.2.1 DLBCL组织芯片的构建与制备 　　1）组织芯片模块制做：将熔化石蜡(加入等量的蜂蜡)制作成2.5×2×0.5大小的空白蜡块，设计制作受体蜡块。 　　2）组织芯片的设计和制备：将原蜡块放在45℃温箱中烘5-10min待蜡块变软，然后，先在显微镜下定位，避开出血坏死区，选取肿瘤组织丰富的区域，用穿刺针从组织块选定部位逐个取出组织芯，放入预先设计的阵列模块中，制成组织芯片。将制成的组织芯片面朝下放在铜板上，于55℃放置30min，轻压模块使组织柱在模块中排平。待冷却后放入72℃烤箱中，维持时间1小时，目的是使组织芯与受体蜡块充分融合。 　　3）组织芯片蜡块采用连续切片，切片厚度约4μm，用多聚赖氨酸处理过的玻片捞片，置37℃电热恒温箱中烤片过夜，以备实验用。 　　1.2.2 免疫组化结果判定 ：CD20、CD79a、CD3、CD10、Bcl-6、MUM-l用来帮助判断肿瘤细胞及明确诊断并进行GCB 和non-GCB分组；CD20、CD79a、CD3、CD10着色部位位于细胞膜，如果有大于30％以上的细胞出现阳性着色记为阳性； Bcl-6、MUMl为胞核着色，如果有大于30％以上的细胞出现阳性着色记为阳性。 　　1.2.3 FISH结果判断 　　bcl-6双色分离探针是在bcl-6基因的5’和3’端分别设计两个探针，分别标以红色和绿色荧光。bcl-6基因正常的细胞显示为2个红色和绿色荧光靠的很近或融合的信号；当bcl-6基因出现重排时，bcl-6之1个等位基因的5’和3’端分离，红色和绿色荧光信号分开，表现为两个分离的信号；另外一个等位基因未分离，表现为一个融合的黄色信号或两个靠的很近的红色和绿色信号。当多于20％的肿瘤细胞核，呈现红色和绿色荧光信号分开时，即确定有bcl-6基因重排。1.3统计处理 　　免疫组化结果采用百分率比较采用X2检验,当样本例数较少时，采用Fisher确切概率检验；蛋白表达的相关性采用Spearman相关检验，采用SPSS13.0软件进行统计学处理，以P0.05为差别有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 bcl-6基因重排 　　对于掉片或信号图像不清晰的病例，另外补切片重做FISH。选择背景低、信号强、细胞轮廓清楚的肿瘤细胞计数。53例DLBCL患者中bcl-6基因重排12例(22.6％)，其中GCB型2例（16.7%），non-GCB型10例(24.4%)。基因重排与临床特征的关系见（表1），基因重排与DLBCL分组之间的关系见（表2）。 　　2.2 bcl-6基因重排与Bcl-6蛋白表达的关系 　　在有bcl-6基因重排的12例患者中，有3例表达Bcl-6蛋白，表达率为25%（3/12）。bcl-6基因重排与Bcl-6蛋白表达之间无统计学意义（P=1.000）。Bcl-6蛋白表达与bcl-6基因重排的关系见。 　　3 讨论 　　 　　 　　在本组试验中，bcl-6基因重排率为22.6%（12/53），其中GCB组为16.7%（2/12），non