延灵丹方对卵巢早衰小鼠激素水平及凋亡调控蛋白Bcl―2Bax表达影响.docVIP

延灵丹方对卵巢早衰小鼠激素水平及凋亡调控蛋白Bcl―2Bax表达影响 　　[摘要] 目的 探讨延灵丹方对小鼠卵巢早衰（POF）模型激素水平及凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。 方法 将40只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为4组，包括空白组、模型组、延灵丹方组、西药组。除空白组外，其余各组建立免疫性POF小鼠模型。延灵丹方组给予延灵丹药液灌胃，西药组给予戊酸雌二醇灌胃，空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃，各组均为2次/d，连续15 d。运用酶联免疫吸附测定实验检测小鼠血清雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平；Western blot法检测卵巢组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。 结果 与空白组比较，模型组小鼠血清E2水平降低，血清FSH水平升高（P 0.01），血清LH水平有一定程度升高（P 0.05）；与模型组比较，延灵丹方组及西药组小鼠血清E2水平均升高，FSH、LH水平均降低（P 0.01）。与空白组比较，模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白表达减少，Bax蛋白表达增加（P 0.01），且Bcl-2/Bax下降（P 0.01）；与模型组比较，延灵丹方组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白表达显著增加，Bax蛋白表达减少（P 0.01），Bcl-2/Bax明显上升（P 0.01）。 结论 延灵丹方通过下调卵泡及卵巢间质Bax蛋白的表达，上调Bcl-2蛋白的表达，抑制卵巢颗粒细胞的过度凋亡，调节卵巢激素水平，改善卵巢功能。 　　[关键词] 延灵丹方；卵巢早衰；性激素；Bcl-2；Bax；颗粒细胞；凋亡 　　[中图分类号] R711.75 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）07（c）-0042-04 　　月经初潮年龄正常或青春期延迟，第二性征发育正常的女性，在40岁之前闭经伴血清促性腺激素水平升高和雌激素水平下降则为卵巢早衰（premature ovarian failure）。该病可出现围绝经期综合征症状、不孕症，增加罹患骨质疏松和抑郁症的风险，并可导致不同程度的认知功能障碍及神经系统疾病，近年来其发病率逐年上升[1-2]。研究发现，各种原因导致的卵巢早衰大都伴随着卵巢颗粒细胞的凋亡，因此卵巢颗粒细胞的凋亡可能成为卵巢早衰发病的始动因素[3-4]。中药复方制剂――延灵丹在治疗卵巢早衰排卵障碍和生殖内分泌紊乱方面取得了良好的临床疗效[5]。但是关于延灵丹对卵巢颗粒细胞凋亡的影响尚鲜见报道。本课题拟观察延灵丹方对卵巢早衰模型小鼠激素水平的调节及对卵巢颗粒细胞凋亡调控Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，探讨延灵丹方对免疫性卵巢早衰模型小鼠的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　40只7～8周SPF级健康雌性BALB/c小鼠，由齐齐哈尔医学院动物实验中心提供[合格证号SCXK（黑）2015-0004]，饲养于齐齐哈尔医学院清洁级实验动物中心，室温维持在25℃，湿度60%～70%，通风良好。 　　1.2 试剂 　　中药饮片购自齐齐哈尔市中医医院中药局；戊酸雌二醇片购自德国拜耳医药有限公司，批号小鼠透明带多肽溶液购自天津森润生物技术有限公司，批号P00102；弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂购自上海伟进生物科技有限公司，批号F5884、F5502；小鼠血清雌二醇（E2）、小鼠促黄体生成激素（LH）和小鼠促卵泡生成激素（FSH）的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒购自上海酶联生物有限公司，批 　　1.3 仪器 　　MP-120-2型电子天平（上海第二天平仪器厂）；BX53光学显微镜（日本奥林帕斯公司）；RM2235冰冻切片机（德国Lecai公司）；Multiskan MK3酶标仪（芬兰Thermo公司）。 　　1.4 药物配制 　　1.4.1 中药配制 水煎地黄12 g、菟丝子12 g、杜仲12 g、山芋12 g、山药12 g、党参6 g、黄芪6 g、首乌6 g、黑蚁6 g、枸杞子6 g、牡蛎6 g、丹参6 g、香附6 g、甘草3 g，并浓缩至2倍临床等效剂量1.08 g/mL的无菌药液，4℃冰箱保存。 　　1.4.2 西药配制 三蒸水溶解戊酸雌二醇片，浓度为0.006 mg/mL。 　　1.5 动物模型及实验分组 　　取6 mg ZP3透明多肽粉末，加入6 mL双蒸水配成溶液，与弗氏完全佐剂按1∶1配制成免疫试剂，与弗氏不完全佐剂按1∶1配成免疫强化试剂。每日上午9：00，每只小鼠给予0.15 mL免疫试剂注射双后脚掌处及腹腔皮下，14 d后以免疫强化试剂0.15 mL再次注射双后脚掌处及腹腔皮下加强免疫，建立免疫性卵巢早衰模型[