第十六讲 临床电泳分析仪器2012.ppt

第十六章 临床电泳分析仪器 电泳技术用途-分离、鉴定、纯化 在临床诊断中：血清蛋白，血红蛋白糖蛋白、脂蛋白的分离鉴定和含量的测定，还有血清酶以及免疫化学的检验。它为医生提供了诊断某些疾病的依据如肝炎，肾病等 在科研工作中主要用来提纯蛋白质和蛋白质的结构分析。 电泳技术已广泛用于蛋白质、多肽、氨基酸、核苷酸、无机离子等成分的分离和鉴定，甚至还用于细胞和病毒的研究。 蛋白质电泳动画.swf 影响电泳的因素 （一）电场强度 （二）溶液的pH值 （三）溶液的离子强度 （四）电渗作用 （五）粒子的迁移率 （六）吸附作用 电泳分析技术的分类 1、根据电泳电压的高低 常压电泳 高压电泳 2、根据电泳中是否使用支持物 自由电泳:在自由溶液中进行的电泳方法 区带电泳:更常用的电泳是将试样放在支持介质（载体）上进行泳动，并在支持介质上形成一个个区带 3、按支持物的物理性状不同 ①纸电泳 ②纤维薄膜电泳 如醋酸纤维素电泳 ③凝胶电泳 如琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳 4、按支持物的装置形式不同： ①平板式电泳 ②垂直板式电泳 ③垂直柱式电泳 电泳分析仪可分为两大类: 临床实验室常规类,如全自动荧光/可见光双系统电泳仪、全自动醋纤膜电泳仪、全自动琼脂糖电泳仪; 科研为主兼做临床样本类,如双向电泳及双向电泳,液相色谱--质谱联用、高效毛细管电泳及高效毛细管电泳--质谱联用、高效毛细管芯片电泳、DNA测序系统。 从目前临床 实验室的要求来看电泳仪必须具有下列功能： 1.全自动，必须达到人员离机作业，由点样到出报告没有人工动作。 2.速度快，所有项目应在60min内完成，同时具备急诊项目，如CK、LD等同工酶及亚型项目。 3.项目全，除了血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、CK、LD同工酶等传统项目外，必须还能完成尿蛋白、脑脊液蛋白、免疫固定(单克隆抗体)，碱性磷酸酶(ALP)和s—谷氨酰转肽酶(GGT)同工酶、胆固醇(高密度、极低密度／低密度脂蛋白)、脂蛋白(a)等最新检验项目。 4.灵敏度高，必须采用敏感度高的电泳片，如琼脂糖凝胶系统，才能得到准确度高、分辨率高的电泳结果 第二节 常用电泳技术和电泳方法 一、电泳方法简介 （一）纸电泳 指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳。 （二）醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、 电泳时间短、样品 用量少。因此特别 适合于病理情况下 微量异常蛋白的检测。 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白 （三）凝胶电泳 由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以凝胶作为介质。电泳中常用的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。 它具有机械强度好、 弹性大、透明、化学稳定性高、 无电渗作用、设备简单、 样品量小(1～100μg）、 分辨率高等优点。这种介质 具有分子筛的作用 （四）等电聚焦电泳 1． 等电聚焦电泳过程 一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。 （五）等速电泳 采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解 质之间的空隙中移动， 实现分离。 （六）双向凝胶电泳（二维电泳） 第一向采用等电聚焦 根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。 第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS）就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状 。 (七）免疫电泳 免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。 临床上常用的电泳方法有哪些？p212 第三节 常用电泳设备的基本结构及技术指标 一、常用电泳设备的基本结构 （一）电泳电源 （二）电泳槽 （三）附加装置 附加装置 电泳条带的分析装备 习