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第四章 药物定量分析与分析方法验证 §4.1 定量分析样品的前处理方法 两法均是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反应，使有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Fajans法）测定。 4.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量  例如含锑和含铁的药物，在酸性溶液中可游离出具有氧化性的Sb5+ 、Fe3+氧化碘化钾析出碘，用硫代硫酸钠滴定。（间接碘量法）。 注意事项： 1.湿法破坏所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏烧瓶； 2.所用试剂及蒸馏水均不应含有被测金属离子或干扰测定的其他金属离子等组分； 3.由于整个操作过程所用矿酸量数倍于样品，所以必须按相同条件进行空白试验校正； 4.操作时应在通风橱内进行。 样品的取用量，应视被测含金属有机药物中所含金属元素的量和破坏后所用测定方法而定。 含金属元素量在10μg一100μg范围内时，取样量为10g; 如果测定方法灵敏度较高，取样量可相应减少。 对于生物样品，一般血样10ml一15ml或尿样50ml §4.3 药品质量标准分析方法验证 一、目的 三、需验证的分析项目 1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定； 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的 测定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。 方法精密度 ——表示该分析方法的可重复性(reproducibility) ——反映分析方法的可操作性，是方法验证的基本要点之一 例1：计算下面这一组测量值的平均值（ ），平均偏差（d平均），相对偏差（d平均 ﹪） 55.51,?? 55.50,?? 55.46,?? 55.49,?? 55.51 表示方法 精密度一般用标准偏差(standard deviation，SD或Ｓ)或相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)表示 若设供试品的测定值为Xi，则其平均值为 ，且有n个测定值， SD= SX = 2. 测定法——分别测定法(Ⅰ) 照准确度项下方法，取空白生物基质(如血浆)数份，分别在同一批内和不同批间制备高、中、低 3个浓度的QC样品，并分析测定。 批内RSD ——每一浓度5～6个样品，每个样品测定1次，用随行标准曲线分别计算3个浓度及每1浓度的RSD 批间RSD ——每1分析批内每一浓度制备1个样品，每个样品测定1次；用随行标准曲线计算3个浓度(每一浓度5～6个分析批数据)的RSD 2. 测定法——连续测定法(Ⅱ) 若实际样品测定所用的分析批次少于5批，也可进行3个批次的连续分析(每1浓度的每1批次为5～6个样本)——方差分析法 批间RSD = 批内RSD = = 例2 用ELISA（酶联免疫吸附测定）法检测vero-E6，细胞培养上清正常标本10份的结果（100 × OD490值）为2，3，3，4，4，5，5，5，6，8，求标准差。 精密度和准确度的关系 准确度和精密度是两个不同的概念，但它们之间有一定的关系。 应当指出的是，测定的精密度高，测定结果也越接近真实值。 但不能绝对认为精密度高，准确度也高，因为系统误差的存在并不影响测定的精密度，相反，如果没有较好的精密度，就很少可能获得较高的准确度。 精密度高 准确度较差， 即系统误差较大； 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。 二、用途 （一）药品质量标准起草时，分析方法需经验证。 （二）药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。 准确度 精密度（重复性、中间精密度和重现性） 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 四、验证内容 （一） 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。 测定结果与真实性的差异 用回收率R（recovery）表示 ①接近100% ②相对恒定 测定回收率的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。 RSD一般在2%以内。 1. 含量测定方法的准确度 原料药