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04 蛋白质工程制药 S1 蛋白质工程制药概述 S2 蛋白质工程的基本技术 S3 蛋白质工程制药实例 S1 蛋白质工程制药概述 从基因工程药物到蛋白质工程药物 蛋白质工程的诞生、概念 蛋白质工程的基本过程 蛋白质分子设计 基因工程药物?蛋白质工程药物 1982年第一个基因工程药物：重组人胰岛素 蛋白质工程的诞生 1970S末，Smith等人建立了寡核苷酸点突变改变DNA序列的方法 1982年，一些实验室用此技术来改造蛋白质分子，研究蛋白质的功能 1983年，Ulmer发表了题为“Protein Engineering”的专论 目前已应用于医药领域，并有多种产品上市 已上市的蛋白质工程药物 已上市的蛋白质工程药物 已上市的蛋白质工程药物 蛋白质工程的概念 蛋白质工程（Protein Engineering） (第二代基因工程) 是以蛋白质结构功能关系的知识为基础，通过周密的分子设计以及DNA重组技术，把天然的蛋白质改造成合乎人类需要的新的突变蛋白质(mutein)的一项技术。 蛋白质工程的概念 内涵： 1、从DNA水平改变基因，改造蛋白质 2、一个或多个氨基酸残基 结构域 全新蛋白质 3、有目的地改造，获得期望功能 ——强调分子设计 4、结合DNA重组技术 蛋白质工程的基本过程 蛋白质工程的基本过程 1、分离纯化所需改造的目的蛋白 2、对蛋白进行氨基酸序列测定、X射线晶体衍射分析、核磁共振分析等——结构和功能信息 3、根据结构和功能信息、生物信息学信息，运用蛋白质分子预测技术提出蛋白质设计方案 4、分离克隆该蛋白编码基因，并进行突变改造 5、插入适当的载体表达 6、分离纯化表达产物，检测其生物学功能 蛋白质分子设计 三个基本条件 蛋白质分子设计的分类 蛋白质从头设计 蛋白质分子设计策略 蛋白质分子设计 蛋白质分子设计的三个基本条件： 蛋白质分子设计 蛋白质分子设计的分类 蛋白质分子设计 概念：从蛋白质分子一级结构出发，设计制造自然界中不存在的全新蛋白，使之具有特定的空间结构和预期的生物功能。 蛋白质分子设计 PDA循环（Protein Design Automation） 蛋白质分子设计 蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：CNGRC-GGn-（KLAKLAK）2 蛋白质分子设计 蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：CNGRC-GGn-（KLAKLAK）2 蛋白质分子设计 蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：CNGRC-GGn-（KLAKLAK）2 蛋白质分子设计 蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：CNGRC-GGn-（KLAKLAK）2 蛋白质分子设计 1、顺式思维理性化设计 ——合理化设计 2、基于各种功能筛选平台的非理性逆向改造策略 ——非理性的体外进化 3、两种策略的结合 蛋白质分子设计 1、顺式思维理性化设计 ——合理化设计 基于现有知识信息：蛋白质的结构与功能； 因此，受到已有认识水平的制约。 蛋白质分子设计 2、基于各种功能筛选平台的非理性逆向改造策略——非理性的体外进化 蛋白质分子设计 3、两种策略的结合 S2 蛋白质工程的基本技术 定点突变技术 易错PCR 连续易错PCR（sequential error- prone PCR）：经以上一次PCR突变的基因很难获得满意的结果，于是将前一轮PCR扩增得到的有用突变基因作为下一轮PCR的模板，每次获得的突变累积起来，产生重要的有益突变。 易错PCR 优点：简便易行 DNA改组技术 DNA改组（DNA shuffling），又叫有性PCR（sexual-PCR）等，将单一基因随机片段化，这些片段自配对PCR扩增，由于易错PCR而引入大量随机突变，并在多次循环中重组，使基因在体外迅速进化，从中筛选到有益重组。 DNA改组技术 基因家族改组 DNA改组的不足：从单一基因出发，得到的随机点突变率很低，且有益突变的积累相对缓慢 在自然界中，不同物种同源基因本身就是具有非常丰富的变异，如果加以利用，就可以大大地加速基因在体外的进化速度——基因家族改组（DNA family shuffling） 基因家族改组 S3 蛋白质工程制药实例 蛋白质工程在新药研究中的应用 胰岛素的蛋白质工程研究 蛋白质工程在新药研究中的应用 1、提高药效活性 2、提高靶向性 3、提高稳定性、改善药代动力学特性 4、提高工业生产效率 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 1、糖尿病 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的特效药 2、胰岛素 胰岛素的蛋白质工程研究 胰岛素是治疗糖尿病的