当归多糖联合阿糖胞苷对移植性人白血病小鼠模型肝脏作用机制.docVIP

当归多糖联合阿糖胞苷对移植性人白血病小鼠模型肝脏作用机制 　　[摘要] 白血病是造血系统的恶性肿瘤，白血病细胞极易进入血液并浸润、损伤肝脏。本室既往研究表明，当归多糖（APS）能抑制白血病细胞的增殖和分化，但治疗白血病时对肝脏的影响未见报道。本研究通过尾静脉移植K562细胞建立人白血病NOD/SCID小鼠模型，通过腹腔注射APS、阿糖胞苷（Ara-c）以及两者联合（APS+Ara-c）治疗白血病小鼠，研究对肝脏的影响及其机制。结果表明，与白血病小鼠对照组相比，APS或Ara-c治疗后，外周血白细胞数显著降低；肝功能损伤减轻：丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性与总胆红素（TBiL）降低，白蛋白（Alb）升高；肝脏抗氧化能力下降得以抑制；抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性升高，谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）降低；炎症因子IL-1β，IL-6水平降低；肝指数减少；白血病细胞对肝小叶浸润减少，且凋亡率增加。APS+Ara-c联合治疗后肝脏病理恢复更加显著。综上所述，APS和Ara-c可减少肝脏内白血病细胞聚集，降低肝功能损伤和炎症因子水平，提高肝组织抗氧化能力，提示APS+Ara-c联合治疗可以发挥更好作用。 　　[关键词] K562 细胞株；人白血病小鼠模型；当归多糖；阿糖胞苷；肝损伤 　　[收稿日期] 2013-07-31 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目 　　[通信作者] *王亚平，教授，博士生导师，Tel：（023E-mail：ypwangcq@ 　　白血病是造血系统的恶性肿瘤，白血病细胞具有较强的游走能力，很容易离开原发部位进入血液并浸润肝脏、肺等非造血器官。迄今，治疗白血病的药物主要以非靶向细胞毒药物为主，如甲氨蝶呤、6巯基嘌呤、阿糖胞苷等，它们对正常的组织细胞也会造成严重损害。肝脏是大多数药物分解代谢的器官，抗肿瘤药物在治疗肿瘤时对肝脏损伤值得高度关注。有研究证明，抗白血病药物在肝脏内潴留时间较短，且药物浓度相对较低，这些因素可能使肝脏成为白血病细胞的庇护所[1]。 　　当归多糖（Angelica polysscharides， APS）是传统补血中药当归的主要有效成分之一。本室既往研究表明，APS对正常细胞和肿瘤细胞存在双向调节作用，即APS既能促进造血干/祖细胞的增殖分化，又能抑制白血病细胞的增殖并诱导其向成熟方向分化[2-3]。本研究在成功建立人白血病NOD/SCID小鼠模型基础上，通过APS，阿糖胞苷（Ara-c）单独以及联合治疗白血病模型小鼠，观察在治疗白血病时对肝脏形态与功能的影响及其相关作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 雄性NOD/SCID小鼠，8～10周龄，体重18～23 g，由重庆医科大学实验动物研究所提供。 　　1.2 药品、试剂与仪器 当归多糖购自陕西慈缘生物技术有限公司（批号CY130421，甘肃岷县当归提取，纯度95%，注射用生理盐水配制为20 g?L-1，过滤除菌）。阿糖胞苷（国药准字相对分子质量279.68，注射用生理盐水配制为2.5 g?L-1）。SOD，MDA，GSH，GSH-Px购自南京建成生物工程研究所。IL-1β，IL-6 ELISA试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。TUNEL试剂盒购自碧云天生物技术研究所。550酶标仪（BIORAD），CM 1950冰冻切片机（Leica），IX71-A12FL/PH荧光显微镜（Olympus），HFX-IIA光学显微镜（Nikcon）。 　　1.3 人白血病小鼠模型的建立 动物随机分为正常组、模型组、当归多糖治疗组（APS组）、阿糖胞苷治疗组（Ara-c组）、当归多糖与阿糖胞苷联合治疗组（APS+Ara-c组）。除正常组注射等量生理盐水外，其余组按本课题组方法，建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型[4]，即给小鼠腹腔注射环磷酰胺每只2 mg，qd，2 d，第3天从尾静脉注射移植对数生长期K562细胞（2×107个/只），接种K562细胞30 d后模型建立成功。从第31天开始分别腹腔注射APS（200 mg?kg-1?d-1），Ara-c（2.5 mg?kg-1?d-1）以及APS （200 mg?kg-1?d-1）+Ara-c（2.5 mg?kg-1?d-1）联合治疗各组小鼠，共14 d，接种K562细胞45 d处死小鼠取材。 　　1.4 外周血白细胞计数与分类和肝功能检测 各组小鼠取尾静脉血，自动血细胞分析仪测定白细胞总数，血涂片经Wright′s染色，光镜下分类计数。取小鼠眼球血制备血清，全自动生化仪检测ALT，AST，Alb，TBiL等肝功能指标。