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手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态影响研究 　　【摘 要】目的：探讨手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态的影响。方法：回顾性分析性了12例保乳术患者以及15例乳腺癌根治术患者的临床资料，于手术前后分?e采用亚G1峰法以及Ki-67法分别对其口腔黏膜凋亡率以及增殖率进行检测、分析，并对两组手术前后口腔黏膜细胞状态以及组间细胞状态进行比较。结果：两组患者在年龄、性别、营养状态等方面的差异均无统计学意义（P0.05）；保乳术组手术前后口腔黏膜凋亡率分别为（27.49±2.27）%及（26.97±1.78）%，保乳术组患者手术前后增殖率分别为（16.02±2.19）%及（16.32±2.38）%；根治术组手术前后口腔黏膜凋亡率分别为（27.28±2.08）%及（27.44±2.17）%，根治术组手术前后口腔增殖率分别为（16.11±1.28）%及（16.35±1.30）%；两组手术前后口腔黏膜凋亡率及增殖率差异均无统计学意义（P0.05），且两组术后口腔黏膜凋亡率及增殖率差异均无统计学意义（P0.05）。结论：手术创伤对在体口腔黏膜细胞状态不产生显著性影响。 　　【关键词】手术创伤；在体口腔黏膜；凋亡率；增殖率 　　【中图分类号】R318 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2018）06-03--01 　　外科营养在临床上受到了广泛地关注，尤其对于围术期患者，营养支持已经被提升至营养治疗的地位[1]。所以，如何及时以及有效地对单个机体的营养状态加以评价，具有十分重要的意义与价值，以往关于外科营养的评价标准还存在着时间滞后以及特异度低下等方面的缺陷，已完全不能满足指导临床营养治疗[2]。因此，探索一种及时、特异度高以及高效的营养评价标准已经逐渐发展成为人们的迫切需求。 　　之前，我们的研究团队已经发现，口腔黏膜细胞状态受到人体营养状态的影响，营养不良患者的口腔黏膜凋亡率以及增殖率显著低于正常人，且提出可通过检测口腔黏膜细胞凋亡率以及增殖率来对机体的营养状况加以评价[3-4]。然而，围术期患者机体口腔黏膜细胞的凋亡率以及增殖率除了受到营养等因素的影响以外，是否同样也会受到手术创伤等方面因素的影响呢？本研究带着这个问题进行逐一探讨，现将结果报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选择2010年12月至2013年12月入住我院的12例保乳术患者以及15例乳腺癌根治术患者作为研究对象，术前采用患者总体主观评价法PG-SGA进行营养评定，结果显示均无营养不良。采用ELSIA法对各项生化营养指标均显示正常；年龄23～54岁，平均（38.90±2.33）岁；无肝肾功能不良、无恶液质以及无代谢性疾病；无口腔局部性疾病；围术期基本可进行正常的饮食。 　　1.2 口腔黏膜细胞的收集及处理 分别于手术前1、2d，术后1、2d，于晨起洗漱以及进食之前，采用经消毒的生理盐水将口腔清洁干净之后，再用经消毒的医用棉签搔刮擦拭双侧口颊黏膜，每侧擦拭次数各为3次，然后用棉签放入约为15mL的生理盐水的清洁容器之中进行缓缓地震荡，以500目的筛网进行过滤，再经转速为800rpm的离心机离心5min，制作成细胞悬浮液，将上清液弃去，后用质量浓度为80%的C2H5OH溶液加以固定，最后置于-20℃温度的冰箱中放置24h备用[5]。 　　1.3 亚G1峰法检测口腔黏膜细胞凋亡率 首先取已经固定好的口腔黏膜细胞液，按照转速为800rpm离心5min，将上清液弃去，使用磷酸盐缓冲溶液（PBS）将细胞洗涤2次之后于80μL PC缓冲液于冰上孵育半小时；然后再使用PBS溶液将细胞洗涤2-3次，用10mg/L碘化丙锭（PI）以及浓度为0.1%的RNA酶于室温条件下避光行DNA染色20min；经上述方法处理的细胞使用FACSort流式细胞仪检测分析。然后采用波长为488nm的激光进行激发，被标记的细胞发射红色荧光被FACSort流式细胞仪透镜接收；最后使用Cellquest软件对上述所测细胞的荧光强度加以处理[6]。 　　1.4 Ki-67/DNA双参数法检测口腔黏膜细胞增殖率 首先取已经固定好的口腔黏膜细胞液，按照转速为800rpm离心5min；经固定的细胞采用PBS洗涤2次，浓度为0.25%的Triton X-100 BSA稀释的鼠抗人Ki-67单克隆抗体于温度为4℃的条件下孵育24h；第二天再使用PBS将细胞洗涤2-3次之后，再加入标有荧光标记的FITC的羊抗鼠IgG抗体，于室温条件下避光孵育半小时；PBS溶液洗涤2-3次之后，再采用浓度为10mg/L的PI以及浓度为0.1%的Rnase A于避光、室温条件下用细胞核DNA染色约20min；使用FACSort流式细胞仪进行检测分析，经波长为488nm的激光进行激发，检测被标记的细胞发射的荧光，