提取方法与部位对浙贝母基因组DNA提取质量影响.docVIP

提取方法与部位对浙贝母基因组DNA提取质量影响 　　摘要：探讨了改良ＣＴＡＢ法、ＳＤＳ法、高盐低ｐＨ法和试剂盒法对浙贝母（Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ Ｍｉｑ．）基因组ＤＮＡ的提取效果。综合比较了各方法提取的ＤＮＡ浓度、纯度、完整性，结果表明高盐低ｐＨ法是比较适合浙贝母新鲜叶片基因组ＤＮＡ提取的方法。比较了分别以叶片和鳞茎为材料提取的ＤＮＡ质量，发现以新鲜叶片为材料提取的ＤＮＡ浓度和纯度较高，更适合用于提取浙贝母基因组ＤＮＡ。 　　关键词：浙贝母（Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ Ｍｉｑ．）；基因组ＤＮＡ；提取 　　中图分类号：Ｓ５６７．２３＋１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）21－4503-03 　　 　　Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 　　ｉｎ Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ 　　 　　ＺＨＯＵ Ｊｉｅ１，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｆｅｉ２，ＪＩＮ Ｘｉａｏ－ｘｉａ２，ＷＡＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｈｕａ２ 　　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｓｃｉ－tｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１８，Ｃｈｉｎａ； 　　２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｗａｎｌｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎｉｎｇｂｏ ３１５１００， Zhejiang，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ， ｈｉｇｈ ｓａｌｔ ｌｏｗ ｐＨ ｍｅｔｈｏｄ， ＳＤＳ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ＤＮＡ Ｍｉｎｉ－ｐｒｅｐ ｋｉｔ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｆｒｏｍ Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ Ｍｉｑ． Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ｐｕｒｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｖａｒｉｏｕｓ ｍｅｔｈｏｄｓ showed ｔｈａｔ ｈｉｇｈ ｓａｌｔ ｌｏｗ ｐＨ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＤＮＡ ｆｒｏｍ Ｆ． ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｆｒｅｓｈ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｂｕｌｂ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ＤＮＡ ｏｂｔａｉｎed ｆｒｏｍ ｆｒｅｓｈ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｔｙ， ｔｈｕｓ ｆｒｅｓｈ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｂｅｔｔｅｒ ｍａｔｅｒｉａｌs ｆｏｒ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆ． ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ Ｍｉｑ．； ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ 　　 　　浙贝母（Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ Ｍｉｑ．）是百合科贝母属的多年生草本植物，又名象贝、大贝、珠贝、土贝、元宝贝、苏贝。浙贝母的鳞茎干燥，性苦、寒，具有清热散结、化痰止咳、开郁之功效，是较为常用的中药材，也是著名的“浙八味”之一［１］。ＤＮＡ的提取是进行各种分子生物学实验的基础，提取的ＤＮＡ浓度和质量对后续实验结果有较大的影响。而中药材中含有丰富的次生代谢产物，使其ＤＮＡ提取较为困难，有顽拗植物之称［２］。本研究比较了用不同方法从中药材浙贝母的新鲜叶片和鳞茎中提取基因组ＤＮＡ的效果，从中找出简单高效的方法，以为开展浙贝母种质资源的遗传多样性分析及其分子鉴定奠定基础。 　　１材料和方法 　　１．１材料 　　材料采集地点为浙江省宁波市鄞州区章水镇，２０１０年３月２０日采集宽叶浙贝母、狭叶浙贝母、多子浙贝母三个品种的新鲜嫩叶，２０１０年１０月５日采集多子浙贝母的鳞茎用于实验。 　　１．２方法 　　１．２．１材料的预处理 　　１）叶片：将新鲜叶片洗净擦干后剪碎，放入预冷的研钵中，加入适量的ＰＶＰ提取液以及２％的β－巯基乙醇进行快速研磨。研磨成均匀的糊状后取适量分装入１．５ ｍＬ的离心管中，待用。 　　２）鳞茎：①将鳞茎去皮洗净后切成细小的状块（冰上进行），放入预冷的研钵中，加入适量的ＰＶＰ提取液以及２％的β－巯基乙醇进行快速研磨。研磨成均匀的糊状后取适量分装入１．５ ｍＬ的离心管中，待用；②将鳞茎去皮洗净后烘干，用万能粉碎机研磨成细粉状，