食品中霉菌毒素检验方法―赭曲毒素A之检验.pdfVIP

94 年 1 月署授食字第0949400850 號公告 食品中黴菌毒素檢驗方法 ―赭麴毒素 A 之檢驗 Method of Test for Mycotoxin in Food －Test of Ochratoxin A 1. 適用範圍：本檢驗方法適用於咖啡、酒類、葡萄汁及米麥製品中赭麴毒素 A 之檢 驗。 2. 檢驗方法：高效液相層析法 ( high performance liquid chromatography, HPLC) 。 2.1. 裝置： 2.1.1. 高效液相層析儀： 2.1.1.1. 檢出器：具有激發波長 333 nm及發射波長 460 nm 之螢光檢出器 (fluorescence detector) 。 2.1.1.2.層析管： RP-C18 ，5 μm ，內徑4.6 mm × 25 cm ，或同級品。 2.1.2. 攪拌均質器 (Blender) ：適用於有機溶媒者。 2.1.3. 振盪器 (Shaker) 。 2.1.4. 離心機 (Centrifuge) ：可達2,500 × g者。 2.1.5. 蒸發器 (Evaporator) ：具氮氣吹乾裝置。 2.1.6.酸鹼值測定儀 (pH meter) 。 2.1.7. 超音波振動器 (Ultrasonicator) 。 2.1.8. 粉碎機 (Grinder) 。 2.2.試藥： 甲醇及乙腈採液相層析級，碳酸氫鈉、聚乙烯甘油 (polyethylene glycerol) 、 氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、鹽酸、醋酸採試藥特級， 赭麴毒素 A (ochratoxin A)對照用標準品 (濃度為 50 μg/mL ) 。 2.3.器具及材料： 2.3.1. 離心管：50 mL ，附PP 材質螺旋蓋。 2.3.2.容量瓶（ Volumetric flask ）：1 mL 、20 mL 、1 L 。 2.3.3.免疫親和性管柱 (Immunoaffinity column) ：採用內含對赭麴毒素A 具專 一性單株抗體之Vicam管柱或同級品。 2.3.4. 濾膜：孔徑0.45 μm ，nylon 材質。 2.3.5. 針筒過濾器 (Syringe filter) ：濾膜孔徑0.45 μm ，teflon 材質。 2.3.6. 玻璃纖維濾紙(Glass microfibre filters) 。 2.4.試劑之調製： 2.4.1.咖啡萃取溶液： 3%碳酸氫鈉溶液及甲醇以 1:1 (v/v)比例混勻。 2.4.2. 酒類及葡萄汁萃取溶液： 稱取聚乙烯甘油 10 g及碳酸氫鈉 50 g ，以水溶解，以0.1 N 鹽酸溶液 調整 pH 至8.3 ，加水定容至1 L 。 1 94 年 1 月署授食字第0949400850 號公告 2.4.3. 米麥製品萃取液： 乙腈及甲醇以3:2 (v/v) 比例混勻。 2.4.4.磷酸緩衝溶液 (Phosphate-buffered saline, PBS) ： 稱取氯化鈉 8 g ，無水磷酸氫二鈉1.2 g ，磷酸二氫鉀0.2 g及氯化鉀 0.2 g ，以 水 990 mL溶解，續以 2N鹽酸溶液調整 pH 至7.4 ，加水定容至1 L 。 2.4.5. 流洗液： 稱取氯化鈉 25 g及碳酸氫鈉 5 g ，以蒸餾水溶解，以0.1N 鹽酸溶液調 整 pH 至8.3 ，加水定容至1 L後備用。 2.4.6. 50% 乙腈溶液： 乙腈及去離子水以1:1 (v/v)比例混勻。 2.4.7. 移動相溶液： 將去離子水、乙