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无花果蛋白酶不同提取方法比较及酶学性质研究

无花果蛋白酶不同提取方法比较及酶学性质研究   摘要:以无花果叶为原料,对乙醇沉淀、单宁沉淀和盐析沉淀3种方法提取的无花果蛋白酶进行了比较。结果表明,乙醇沉淀法操作简单,提取的无花果蛋白酶易分离纯化,比酶活最高,蛋白酶的回收率达 47.99%,总纯化系数为2.05。无花果蛋白酶反应的最适温度为65℃,最适pH值为7.0,当pH值为6.5和8.5时酶活性稳定,Km值约为0.656 0 g/L。   关键词:无花果叶;无花果蛋白酶;乙醇法;单宁法;盐析法;酶学性质   中图分类号:S663.3;Q814.1 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2011)06-1258-03      Study on Comparison of Extraction Methods of Ficin and Enzymatic Characterization   GUO Dong-qing1,JI Fu-jiang1,GAO Jian1,ZHOU Yan-xia1,SONG Shu-liang3,JI Ai-guo1,2,3   (1.Marine School of Shandong University at Weihai,Weihai 264029,Shandong,China;2.School of Pharmaceutical Science,Shandong University, Jinan 250012,China;3.SDU-Weihai International Biotechnology R&D Center,Weihai 264029,Shandong,China)   Abstract: Three methods of extracting ficin from ficus leaves including ethyl alcohol, tannin and sulfate precipitation were compared to explore the most suitable conditions for industrial production of fincin. The result indicated that the recovery ratio of enzyme obtained by alcohol was as high as 47.99%; and the purification fold was 2.05; thus ethyl alcohol precipitation was the best extraction method. The optimal pH for enzyme activity of fincin was 7.0; and the optimal temperature was 65℃. The enzyme exhibited most stable activity at pH 6.5 and 8.5, and its Km value was 0.656 0 g/L.   Key words: ficus leaves; ficin; ethyl alcohol method; tannin method; sulfate precipitation;enzymatic characterization      无花果蛋白酶是有待于开发利用的新的植物蛋白酶[1],它是一类巯基蛋白酶[2],主要存在于无花果的乳胶、叶及花托蛋白质中,用途广泛。无花果蛋白酶除参与蛋白质的分解与迁移外,还与细胞信号的传导有关[3],因其稳定性好、蛋白水解能力强,对多种蛋白质均具有很好的降解作用,因而被广泛应用于食品加工、工业生产和医疗卫生等领域[4,5]。以无花果叶为材料,通过比较乙醇法、单宁法和盐析法3种不同方法,对无花果蛋白酶酶学性质进行研究,为工业化生产及进一步推广应用奠定理论基础。   1材料与方法   1.1材料   1.1.1无花果叶无花果叶,采自山东大学威海分校布兰瑞克品种。   1.1.2试剂酪蛋白、半胱氨酸、三氯乙酸、单宁、乙醇、硫酸铵等均为国产分析纯。   1.1.3仪器Ackman J-20XP型台式低温离心机,美国;Agilent 8543E型紫外分光光度计,美国;电子分析天平,瑞士梅特勒公司;Millipore Elix 5+Milli QS纯水系统,美国;循环水式多用真空泵,郑州长城升工贸有限公司;pHs-25型酸度计;恒温水浴锅,Heidolph HB digit。   1.2方法   1.2.1蛋白质含量测定考马斯亮蓝G-250法[6]。标准曲线的制作参照文献[4],所得吸光度(y)与蛋白质

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