木薯DBE和SBE基因序列分析及其茉莉酸甲酯诱导表达特性.docVIP

木薯DBE和SBE基因序列分析及其茉莉酸甲酯诱导表达特性 　　摘 要 为研究木薯中调控支链淀粉合成的DBE和SBE基因如何被茉莉酸信号调控，首先对木薯基因组数据库中的MeDBE和MeSBE2.1基因进行序列分析，二者都具有α淀粉酶催化结构域且启动子区都具有茉莉酸响应元件等多种响应元件。以木薯品种‘华南八号’悬浮培养细胞为材料，利用qRT-PCR检测木薯MeDBE和MeSBE2.1基因在茉莉酸甲酯处理后的表达特性。结果显示：MeDBE基因的表达在最初短暂上调后持续下调，而MeSBE2.1则持续上调后又恢复最初水平，说明MeDBE和MeSBE2.1基因可被茉莉酸信号调控，进一步推测表明，其受到不同激素信号整合后的综合调控，以影响支链淀粉的生物合成。 　　关键词 木薯 ；DBE基因 ；SBE基因 ；茉莉酸 ；表达分析 　　中图分类号 S533 文献标识码 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.07.010 　　木薯（Manihot esculenta Crantz） 属大戟科（Euphorbiaceae）木薯属（Manihot Miller）植物，原产热带南美洲[1]，是世界三大薯类作物之一，也是第六大粮食作物，具有重要的食用和工业价值。木薯作为一种高光效、高淀粉含量和高水分利用率的热带作物，研究其淀粉合成过程并进一步改善其品质，具有重要的科学和经济价值。 　　在高等植物中，淀粉是储藏碳水化合物的主要形式，一般由直链淀粉和支链淀粉2种葡萄糖多聚体组成。直链淀粉主要由颗粒结合的淀粉合成酶 （Granule-bound starch synthase， GBSS） 催化合成[2]，而支链淀粉的合成非常复杂，在可溶性淀粉合成酶 （Soluble starch synthase， SSS） 的作用下通过α-1，4糖苷键进行葡聚糖链的延伸达到一定长度后，在淀粉分支酶 （Starch branching enzyme， SBE） 作用下，在线性糖链的内部引入α-1，6糖苷键形成分支，并进一步在SSS催化下延长分支，最后淀粉去分支酶（Starch debranching enzyme， DBE）对分支进行修饰，最终合成具有一定结构特性的淀粉结晶体[2]。植物中DBE和SBE都有多种同工酶。根据系统进化关系SBE可以分为SBEI和SBEII 2种类型，它们不仅结构有差异，而且作用于特异的底物：SBEI倾向作用于直链淀粉，主要催化转移相对较长的多糖链，而SBEII倾向作用于支链淀粉，催化转移较短的多糖链[3]。DBE同样存在2种类型，一种为水解普鲁蓝（Pullulan）和极限糊精的α-1，6糖苷键的普鲁蓝酶或称极限糊精酶（Pullulanase；Limit dextirnase），但对糖原和变性支链淀粉的α-1，6糖苷键无活性或弱活性；另一种为以变性支链淀粉、糖原和支链淀粉类似物为底物，催化α-1，6糖苷键的水解的异淀粉酶（Isoamylase），但不能水解普鲁蓝。 　　茉莉酸（jasmonic acid， JA）是植物逆境响应的信号分子，在涉及植物对生物性和非生物性逆境胁迫和植物生长发育过程中的基因调控上发挥着重要的作用。JA作为一种逆境信号转导信号，具有对非生物胁迫反应的功能[4-5]。江月玲和潘瑞炽[6]发现，不同浓度茉莉酸甲酯处理后，花生幼苗中的淀粉、还原糖和可溶性糖降低。Sarkar[7]发现，在离体条件下，茉莉酸甲酯与马铃薯块茎中淀粉的积累相关，胁迫信号可直接影响到淀粉合成酶的活性，并会使淀粉的结构发生改变[8-10]。然而，相关分子机制迄今尚不清楚，为进一步探索茉莉酸信号如何影响木薯淀粉的生物合成，本研究选取了木薯DBE和SBE基因，初步研究其受茉莉酸信号的影响情况。于JGI的木薯基因组数据库v6.1中获得淀粉去分支酶DBE基因序列MeDBE（Manes.05G073400）[11]，和一个淀粉分支酶MeSBE2.1（Manes.09G059400）同时进行分析[12]。生物信息学分析发现MeDBE启动子区具有一个茉莉酸响应元件；MeSBE2.1具有2个茉莉酸响应元件。同时利用木薯悬浮培养细胞对其茉莉酸甲酯（methyl jasmonate， MeJA）诱导表达特性分析中也发现，MeDBE和MeSBE2.1基因可受JA信号调控，并呈现不同的表达趋势。本研究旨在通过序列分析和表达分析，确定JA信号能对MeDBE和MeSBE基因表达造成影响，并探索表达变化特性及其机制，为进一步研究逆境信号通过MeDBE和MeSBE在木薯支链淀粉合成过程中所发挥的作用奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　木薯品种‘华南八号’（‘SC8’） 悬浮培养细胞，该细胞通过叶片愈伤组织建立。现保存