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棘孢木霉发酵培养基响应面法优化 　　摘要：为了得到棘孢木霉（Trichoderma asperellum）发酵的最佳培养基，应用Plackett-Burman设计法对影响棘孢木霉菌丝体产量的关键因子进行了筛选，并进一步采用响应面分析法对影响菌丝产量的关键因素最佳水平进行了研究。结果表明，影响棘孢木霉菌丝体产量的关键因素为硝酸铵和硫酸镁的浓度。通过响应面分析法的拟合和推算，得到在硝酸铵和硫酸镁浓度分别为1.7 g/L和1.43 g/L时，模型预测发酵最佳产量为0.85 g/mL，验证值为0.905 g/mL，预测值与验证值之间吻合较好，约是原始培养基产量的2倍。 　　关键词：棘孢木霉（Trichoderma asperellum）；Plackett-Burman?O计法；响应面分析法 　　中图分类号：Q939.96；Q813.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）23-4531-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.23.028 　　Abstract： In order to obtain the optimal medium composition for Trichoderma asperellum production， the Plackett-Burman design was used to evaluate the effects of seven variables，and the optimum levels of key factors affecting mycelium yield were conducted by response surface analysis methodology. The results showed that，the optimal values of the two parameters determined by response surface analysis methodology were ammonium nitrate 1.7 g/L and magnesium sulfate 1.43 g/L. The mycelium production was 0.85 g/mL，and the actual experimental result was 0.905 g/mL， they were in agreement and it is about two folds of the production before optimization. 　　Key words： Trichoderma asperellum； Plackett-Burman； response surface analysis methodology 　　棘孢木霉（Trichoderma asperellum）能够抑制多种病原菌，促进植物生长，诱导作物的免疫能力，而且能降解土壤中盐类化合物、农药残留等，因而被广泛应用于农林业中。早在20世纪80年代，欧洲国家就开始了棘孢木霉制剂的商品化生产，如今棘孢木霉作为生物防治微生物已经得到了广泛的应用。长期以来，中国登记的棘孢木霉制剂质量较差，货架期很短，在一定程度上影响了推广使用，因此，研究高产棘孢木霉的液体发酵条件尤为重要。 　　试验利用响应面法对棘孢木霉发酵的关键因素进行了优化。从Plackett-Burman试验可以得知，硝酸铵和硫酸镁对棘孢木霉的菌丝产量影响显著，所以利用响应面试验设计以这两个因素为自变量，以棘孢木霉菌丝量为响应值，通过Minitab 15软件对试验数据进行多项式回归分析，建立多元二次回归方程，利用方差分析模型和各因子的显著性获得棘孢木霉液体发酵工艺的最佳参数，以期为棘孢木霉制剂的开发提供参考[1-6]。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1）菌株。棘孢木霉由湖北省生物农药工程研究中心生物技术研究室分离保存，能够拮抗多种植物病害，保存于-80 ℃超低温冰箱。 　　2）培养基。固体培养基：PDA培养基，2%琼脂；种子培养基（g/L）：PDA培养基；发酵培养基（g/L）：蔗糖5，玉米粉8，硝酸铵2，豆粕3，硫酸镁1，磷酸二氢钾1，后期采用优化后的配方。 　　1.2 方法 　　1）发酵培养条件。接种体积分数5%，发酵温度30 ℃，摇床转速200 r/min，发酵96 h。 　　2）Plackett-Burman试验。采用Minitab的Plackett-Burman两水平法对培养基成分进行考察，筛选影响棘孢木霉生物量的重要因素，确定最佳配方。设计水平和排列方式见表1。 　　3）最陡爬坡试验。根据Plackett-