氯沙坦对小鼠前脑缺血再灌后期脑损伤保护作用.docVIP

氯沙坦对小鼠前脑缺血再灌后期脑损伤保护作用 　　摘要：目的研究AT1受体阻断剂氯沙坦对小鼠前脑缺血再灌后期的神经保护作用。方法将成年雄性昆明小鼠随机分为对照组、前脑缺血组、前脑缺血+氯沙坦给药组及氯沙坦单纯给药组，通过阻断双侧颈总动脉60 min建立前脑缺血模型，氯沙坦于缺血前14 d至再灌后20 d，每日腹腔注射1 mg/kg。比较再灌后不同时间点各组小鼠的体重和在水迷宫实验中的学习记忆能力差异。再灌21 d，对各组小鼠取脑、冰冻切片、进行甲苯胺蓝染色，观察海马CA1区神经元损伤情况。结果前脑缺血组小鼠再灌1 d体重即下降，再灌3 d下降程度达到最大，氯沙坦可显著提高缺血小鼠再灌3 d、7 d、14 d及21 d的体重恢复程度。再灌16 d进行水迷宫实验，前脑缺血组小鼠与对照组相比，训练第3天和第4天的平台潜伏期显著延长，而氯沙坦可显著缩短缺血小鼠的平台潜伏期。再灌21 d，前脑缺血组小鼠的海马CA1区神经元密度显著低于对照组，而氯沙坦显著抑制了神经元的缺失。结论 AT1受体阻断剂氯沙坦对小鼠前脑缺血的长期再灌注损伤具有保护作用。 　　关键词：前脑缺血;神经损伤;AT1受体阻断剂 　　中图分类号：R743.3R285.5文献标识码：A 　　doi：10.3969/j.issn2015.01.021文章编号：1672 　　1349（2015 　　脑卒中目前除缺血后短时间内进行溶栓外，尚无较好的治疗手段[1]。AT1受体阻断剂，又称血管紧张素Ⅱ受体1亚型阻断剂（angiotensin Ⅱ type 1 receptor blockers），是目前最常用的高血压一线治疗药物之一。Lutterotti等最早在给予8% NaCl饮用的Dahl盐敏感大鼠上发现，给予AT1受体阻断剂氯沙坦能够暂时减少脑卒中的发生和进展[2]。Dai等[3]在大鼠局灶性脑缺血模型上发现，缺血前5 d侧脑室注射AT1受体阻断剂厄贝沙坦，可以显著改善脑缺血再灌24 h后的神经功能。随后，研究者还在全脑缺血、永久性局灶性脑缺血及培养的神经元OGD等多种脑缺血模型上，验证了AT1受体阻断剂对脑缺血损伤的神经保护作用[47]。但是，目前这些研究主要评价了AT1受体阻断剂对脑缺血早期（7 d以内）的保护作用，但尚不明确其对脑缺血后期（数周）的学习记忆功能及神经损伤的影响。 　　本课题拟利用小鼠双侧颈总动脉结扎引起的前脑缺血模型[8]，研究临床上常用的AT1受体阻断剂氯沙坦对脑缺血再灌后期学习记忆功能及神经元损伤的作用。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物雄性昆明小鼠24只，体重30 g～35 g，购自山西医科大学实验动物中心。所有的动物实验均遵照国家实验动物饲养和使用指南，动物饲养在温度控制的环境（22℃）中，12 h明暗循环，自由饮食和饮水。 　　1.2实验方法 　　1.2.1分组及给药方法将动物随机分为对照组（Control）、前脑缺血组（Bccao）、前脑缺血+氯沙坦给药组（Bccao+Losartan）和氯沙坦单纯给药组（Losartan）。氯沙坦于缺血前14 d至再灌后20 d，每日腹腔注射1 mg/kg。对照组和缺血组则给予生理盐水。 　　1.2.2前脑缺血模型制备以4%水合氯醛（400 mg/kg）腹腔注射麻醉，颈部正中切口，钝性分离出左右两侧颈总动脉，用缝线（60）结扎以阻断双侧颈总动脉血流，缺血60 min后恢复血流，并缝合创口。对照组及氯沙坦单纯给药组仅分离但不结扎双侧颈总动脉。术后动物能自主活动前利用小动物保温箱维持肛温在36.5 ℃～37.5 ℃。 　　1.2.3体重监测为评价小鼠脑缺血再灌损伤的程度，于手术前1 d及术后1 d、3 d、7 d、14 d及21 d对小鼠体重进行监测，并做记录。 　　1.2.4Morris水迷宫实验再灌16 d，利用水迷宫实验评价小鼠的空间学习记忆能力。参照文献[9]，水池中分为四个对称象限Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，在池边有不同的可见图案作为标志。水迷宫测试共5 d。前4 d为记忆获得阶段，在该阶段，将平台放于第1象限水下的固定位置;每天将每只小鼠分别由4个对称象限的预定位置，头向外侧放入水中，直到小鼠找到水下的平台并在上面停留超过5 s，则记录下小鼠寻找平台的时间，即平台潜伏期。测定时间最长为60 s。5 d时为测试阶段，在此阶段，撤去平台，将小鼠由Ⅱ、Ⅲ象限放入水中，测试小鼠在第1象限内的停留时间。实验通过摄像头录像，并通过辅助图像分析软件进行分析。 　　1.2.5病理切片及甲苯胺蓝染色前脑缺血再灌21 d，以4%水合氯醛腹腔注射麻醉小鼠，经左心室插管灌流。灌流液依次采用生理盐水及4%多聚甲醛固定液。后固定，分别用15%和30%的蔗糖溶液进行脱水。