动物细胞融合-更多文档分类.doc

HYPERLINK /retype/zoom/9b36ca186edb6f1aff001f0a?pn=1x=0y=1268raww=95rawh=94o=png_6_0_0_135_63_82_79_892.979_1262.879type=picaimh=94md5sum=ba8331867883ec52950f1fd8a6dabbb8sign=5oom=png=0-13340jpg=0-0 \t _blank 姓名 孙嘉璋 系年级 2010及临床八年 组别 同组者 科目 细胞生物学实验 题目 动物细胞融合 学号 201000232115 【实验目的】 1.了解动物细胞融合的常用方法 2.学习化学融合和电融合的基本操作 3.观察动物细胞融合过程中的行为和变化 【实验原理】 1.病毒诱导融合 仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可以介导病毒同宿主细胞融合，也可以介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。 2.化学诱导融合 很多化学试剂都能诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG），二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂，磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复的过程中相接处的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是被广泛使用的化学融合剂。 3.电击诱导融合 包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制，融合概率高，作用机制明确，可重复性高等优点。 【实验材料】 1.材料 鸡血红细胞 2.试剂 50%PEG、0.85%氯化钠溶液、GKN缓冲溶液 3.器材 倒置显微镜、离心机、量筒、注射器、载玻片、盖玻片、离心管等 【实验步骤】 1.取离心管，加入冷藏的鸡血1ml，加入4ml 0.85%氯化钠溶液，摇匀 2.将离心管放入离心机中，以1000-1200r/min的速度离心5分钟左右。取出离心管，弃掉上清液，再加入4ml氯化钠溶液，重复以上操作。 3.取离心管，弃掉上清液后，按照红细胞沉积的体积，加入1-2mlGKN溶液，摇匀。 4.取以上溶液1ml，加入3mlGKN溶液，再次摇匀 5.取以上溶液1ml，加入0.5mlPEG，先静置1-2min，再将溶液摇匀后，静置1-2min。 6.用滴管取溶液制成涂片，置于显微镜下观察。 HYPERLINK /retype/zoom/9b36ca186edb6f1aff001f0a?pn=2x=0y=1268raww=95rawh=94o=png_6_0_0_135_63_82_79_892.979_1262.879type=picaimh=94md5sum=ba8331867883ec52950f1fd8a6dabbb8sign=5oom=png=13341-358683jpg=0-72437 \t _blank 姓名 孙嘉璋 系年级 2010及临床八年 组别 同组者 科目 细胞生物学实验 题目 动物细胞融合 学号 201000232115 【实验结果】 HYPERLINK /retype/zoom/9b36ca186edb6f1aff001f0a?pn=2x=0y=0raww=893rawh=659o=jpg_6_0_______type=picaimh=354.22172452407614md5sum=ba8331867883ec52950f1fd8a6dabbb8sign=5oom=png=13341-358683jpg=0-72437 \t _blank HYPERLINK /retype/zoom/9b36ca186edb6f1aff001f0a?pn=3x=0y=1268raww=95rawh=94o=png_6_0_0_135_63_82_79_892.979_1262.879type=picaimh=94md5sum=ba8331867883ec52950f1fd8a6dabbb8sign=5oom=png=358684-663212jpg=72438-128126 \t _blank 姓名 孙嘉璋 系年级 2010及临床八年 组别 同组者 HYPERLINK /retype/zoom/9b36ca186edb6f1aff0