汞离子胁迫对茭白生理生化指标影响的研究初步.docVIP

PAGE PAGE 4 汞离子胁迫对茭白生理生化指标影响的研究初步 沈慧华 中北学院 01级20 班生物技术[摘要] 研究了在目前工业污水污染情况日益严重的情况下，某些重金属离子如：汞、镉、铅等对植物的影响，在国内尚无这方面的研究。本课题主要研究了重金属离子中的Hg2+对茭白Zizania latifolia Turcz.的影响，并分析了在此过程中茭白幼茎中一系列生理生化指标的影响，如MDA含量、可溶性蛋白含量、SOD活性和POD活性以及这些指标变化的情况，并结合在不同浓度Hg2+的胁迫下茭白黑粉菌在幼茎中的分布状态变化来加以研究。本课题的试验结果表明，当Hg2+达到2 mg/L以上的时候，上述生理生化指标发生了明显的变化，与此同时， Hg2+胁迫下的茭白幼茎体内的茭白黑粉菌也从原有的正常分布变化到已没有分布。本文试图从分析以上的各项生理生化指标所发生的变化，试图说明其与“雄茭”的产生可能具有的联系. [关键词] 茭白，茭白黑粉菌，Hg2+，胁迫 0 引言……pag 1 茭白（Zizania latifolia Turcz.）属禾本科多年生水生草本植物.茭白在生长期间，由于受到体内共生的茭白黑粉菌（Ustilago esculenta P.Henn.）所分泌的吲哚乙酸的刺激作用，茎尖呈肉质肥大，供食用，是我国的特产水生蔬菜。茭白主要产地在江浙两省，每年有相当部分的茭白不再膨大而变为“雄茭”，在生产上造成较大的损失。关于“雄茭”的产生一般认为是由于环境条件、栽培措施等因素的影响[1。2]。 由于一些茭白产地工业的发展，环境污染日益加重，大量的工业污染物为经过彻底的处理，甚至是未经任何处理而直接排入到自然界中，这些污染物、尤其是一些重金属离子的污染，如汞、镉、铅等重金属离子的温然，毒性很大，它们能在生物体内被富集，阻滞植物生长，并可进入食物链直接或间接得危害动物和人体健康。本研究选择贡离子为代表来研究它是否和“雄茭”的形成有内在的联系，目前在国内外尚无此方面的研究报道。本文比较研究了不同浓度的Hg2+对茭白幼茎的胁迫导致茭白体内一些生理生化指标所发生的相应变化，根据茭白体内共生的茭白黑粉菌的动态变化过程，为进一步了解重金属离子污染与雄茭的形成之间的联系提供一些有益的参考数据。[3] 1 材料与方法……pag1-pag2 试验所用材料采自于苏州市东山镇附近的两熟茭白品种，并种植于南京师范大学生命科学学院种植园水生植物种植池内，分批对茭白进行污染试验. 1.1 处理去离子水 处理液用去离子水配制的Hogland培养液配制，以避免单盐毒害: 单离子系列浓度为0.5、1、2、5mg/L HgCl2,各处理组均设置一个对照样，每次试验均为3个重复.各项生理指标分别在第5天进行测定，最终结果取3次重复测定的平均值. 1.2 丙二醛(MDA)含量的测定 参照Heath和Parker的硫代巴比妥酸（TBA）比色法[4] 测定.单位nmol.g-1 1.3 可溶性蛋白含量的测定 参考Bradford的方法，以牛血清白蛋白BSA为标准蛋白，用754型分光光度计在620nm下测定，先制定标准曲线，再通过标准曲线换算出蛋白含量，单位mg.g-1 1.4超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定 参照Giannopolitis等的方法，以抑制NBT光化还原50%为一个酶活性单位[5].步骤 ：在20ml试管中加入一定量酶提取液，9mlTris/HCl缓冲液（50mmol/L Tris/HCl，1mmol/L二乙撑三胺基五乙酸pH8.20），于25℃超级衡温水浴中放置20min，用微量注射器加入40μl预热的邻苯三酚溶液（45mmol/L邻苯三酚于10mmol/LHCl中），准确反应3min，迅速加入一滴营养液，立即混匀，室温下反应5min，于1h内倒入3cm光径的样品中，对照杯中加9mlTris/HCl缓冲液，室温25℃，每隔30s测定一次A420，自氧化率（Ao）控制在0.06/min.[6] 1.5 过氧化物酶(POD)活性的测定 参照陈雄等的愈创木酚氧化法[7]. 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中,在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈伤创木酚氧化,生成茶褐色物质,可用分光光度计测量生成物的含量. 2 结果与讨论……pag2-pag4 2.1 Hg2+污染对茭白幼茎MDA含量的影响 Hg2+胁迫会打破植物细胞内自由基的动态平衡状态，导致自由基的过量积累，而MDA作为一种膜质过氧化产物，其含量的明显增高揭示了被胁迫细胞的膜的完整性遭到破坏[8].在Hg2+低于1mg/L时，MDA含量上升缓慢，和对照组相比无明显升高；结合SOD、POD等抗氧化酶类活性的变化，可能揭示这两种酶在低浓度胁迫状态下，能缓解膜质过氧化过程；随