植物油中胆固醇的测定 气相色谱-质谱法（征求意见稿）.docVIP

GB/T ××××—2005 PAGE II PAGE 1 吉林省卫生厅植物油中胆固醇的测定 气相色谱-质谱法 吉林省卫生厅 植物油中胆固醇的测定 气相色谱-质谱法 Determination of cholesterol in vegetable oils—GC-MS method (送审稿) ICS 发布 发布 DB DBS22/006 —2012 2012-0-0 2012-0-0发布 DBS22/006—2012 PAGE I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。 本标准主要起草人：张庆波、邴炜、华蕾、石金娥、刘静秋、赵立群、王洋、李宁、郎乐、李滢倩、刘桂华、刘斌、王庆峰、李媛媛、任明月、侯宇。 PAGE 5 植物油中胆固醇的测定 气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了植物油中胆固醇的气相色谱/质谱测定方法。 本标准适用于植物油中胆固醇的测定。 本标准方法检出限为：0.10 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696:1987，MOD） 3 原理 试样经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化，石油醚和乙醚混合液提取，正己烷溶解定容后，采用气相色谱/质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂 除另有说明外，所有试剂，均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 正己烷。 无水乙醇。 乙醚。 石油醚：沸程30 ℃～60 ℃。 氢氧化钾。 无水硫酸钠。 胆固醇：纯度≥99 %。 氢氧化钾溶液（600 g/L）：称取60 g氢氧化钾，加水100 mL混合溶解。 石油醚和乙醚混合液（1+1，体积比）：量取100 mL石油醚，加100 mL乙醚混合。 胆固醇标准贮备液：称取胆固醇标准品0.05 g（精确至0.1 mg），用正己烷溶解定容至50 mL，溶液每毫升相当于1 mg胆固醇， 4 ℃密封可贮藏半年。 胆固醇标准工作溶液：根据需要吸取适量的胆固醇标准储备液，用正己烷逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液， 4 ℃保存。 胆固醇基质标准工作溶液：根据需要吸取适量的胆固醇标准工作溶液，用阴性样品提取液配制成浓度范围在0.30 μg/mL～5.00 μg/mL的系列基质标准工作溶液，该溶液现用现配。 5 仪器和设备 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源。 分析天平：感量0.1 mg。 旋转蒸发仪。 电子恒温水浴。 6 试样制备与保存 6.1 试样的制备 取有代表性样品，制成实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记。 6.2 试样的保存 将试样于2 ℃～8 ℃下保存。 7 测定步骤 7.1 样品处理 7.1.1皂化 称取试样1.0 g（精确至0.001 g），于250 mL平底烧瓶中，加入30 mL无水乙醇（4.2），10 mL氢氧化钾溶液（4.8），混匀。将试样在90 ℃水浴上缓慢皂化回流1h，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5 mL无水乙醇（4.2）自冷凝管顶端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温。 7.1.2 提取 定量转移全部皂化液于250 mL分液漏斗中，用30 mL水分2次～3次冲洗平底烧瓶，洗液并入分液漏斗，再用40 mL石油醚和乙醚混合液（4.9）分2次～3次冲洗平底烧瓶，洗液并入分液漏斗，振摇2 min，静置，分层。转移水相于第二个分液漏斗，再用30 mL石油醚和乙醚混合液（4.9）重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相，用蒸馏水每次100 mL洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化，提取液通过约10 g无水硫酸钠脱水，转移至150 mL平底烧瓶中。 7.1.3 浓缩 将上述提取液经旋转蒸发仪于45℃条件下蒸发至近干，用正己烷定容至5 mL,待GC-MS测定。 7.2 阴性样品提取液的制备 取不含胆固醇的阴性植物油样品，按7.1步骤制备阴性样品提取液，用于配制胆固醇基质标准工作溶液。 7.3 测定条件 7.3.1 气相色谱-质谱参考条件 色谱柱：DB-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）毛细管色谱柱或相当者； 色谱柱温度程序：初始温度220℃，保持1min，以30℃/min的速率，升温至280℃，保持9min； 载气：高纯氦气，