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犬腹泻病原菌分离鉴定及药物敏感性分析 　　摘要：对湖南常德地区5例犬腹泻病直肠粪便采样，进行细菌分离鉴定；用世界卫生组织（WHO）推荐的Kirby-Bauer氏法对分离菌株进行药敏试验，筛选抗致病菌的敏感药物。结果表明，5例样本中分离鉴定出4株沙门氏菌、5株大肠埃希菌，分离率分别为44.44%、55.56%。分离株沙门氏菌对新霉素、卡那霉素、妥布霉素、复方新诺明、庆大霉素等5种药物敏感，对多黏菌素B、四环素2种药物中介，对其余10种药物耐药；分离株大肠埃希菌对红霉素、妥布霉素、复方新诺明3种药物敏感，对卡那霉素、呋喃妥因、多黏菌素B、庆大霉素4种药物中介，对其余10种药物耐药。 　　关键词：犬；大肠埃希菌；沙门氏菌；分离；药敏试验 　　中图分类号：S858.292.51 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）04-0170-02 　　收稿日期：2013-07-19 　　基金项目：湖南省高校重点实验室项目（编号：2008）；2011年湖南省“十二五”重点建设学科项目（编号：2011）；湖南省高校创新平台开放基金（编号：10K043）；湖南省重点实验室项目（编号：2012）；湖南省科学技术厅计划项目（编号：2013FJ3018）；湖南省常德市科技局项目（编号：2013NK02）。 　　作者简介：李淑红（1964―），女，山东禹城人，硕士，教授，从事动物科学专业教学与研究。E-mail：wangren6332@163.com。腹泻是临床上多种疾病经过中表现的主要症状之一，是具有腹泻症状疾病的统称，可导致犬营养不良、生长发育障碍和工作能力丧失，幼龄犬发生率和死亡率均很高[1]。病犬表现排便次数明显增多，粪便稀薄如水样或稀粥样。由细菌引起犬腹泻较常见，犬的肠道内有大量潜在的致病菌，但不是每种细菌都与临床疾病有明确的联系。引起犬肠道感染的致病菌包括肠致病性大肠埃希菌、无致病性大肠埃希菌、沙门氏菌属病菌、小肠结肠炎耶尔森菌、弯曲菌属病菌、毛状芽孢杆菌、梭菌属病菌、葡萄球菌和志贺菌属病菌[2]。其中，以大肠埃希菌最常见，其次为犬沙门氏菌，沙门氏菌病别称副伤寒，是由沙门氏菌属细菌引起的人畜共患病[3]。本试验通过对5例犬腹泻病粪便进行采样、分离鉴定、革兰氏染色镜检、生化试验，并对分离株进行药敏试验，筛选抗致病菌的敏感药物，为临床用药和治疗犬腹泻病提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1药品牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、氢氧化钠、蒸馏水、无菌水；结晶紫、番红、碘液、香柏油、二甲苯、95%乙醇等。11种肠埃希菌属细菌生化编码鉴定管由浙江省杭州微生物试剂有限公司生产。营养琼脂（NA）、麦康凯培养基（MAC）、伊红-美蓝培养基（EMB）、SS琼脂培养基、亚硫酸铋琼脂（BS）成品均由浙江省杭州天和微生物试剂有限公司生产；营养肉汤（NB）、革兰氏染色试剂由微生物实验室配制。 　　1.1.2药敏纸片药敏纸片为浙江省杭州天和微生物试剂有限公司采用美国NCCLS最新药敏试验法规制备的标准厚纸片，直径6.35 mm，纸片含药量符合标准。本试验共选用17种药物敏感试纸，包括新霉素（新）、羧苄青霉素（羧）、氨苄青霉素（氨）、头孢拉定（VI）、卡那霉素（卡）、先锋霉素V（V）、阿莫西林（莫）、四环素（四）、红霉素（红）、万古霉素（万）、妥布霉素（妥）、复方新诺明（复）、呋喃妥因（呋）、萘啶酸（萘）、链霉素（链）、庆大霉素（庆）、多黏菌素B（多）。 　　1.1.3主要仪器电子天平、生物显微镜、恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、干燥箱、无菌操作台、微量移液器等。 　　1.1.4病料来源湖南省常德市城西宠物医院提供5只腹泻犬，其中有3只丝毛犬、1只中华田园犬、1只小型猎犬。 　　1.2方法 　　1.2.1培养基配制营养肉汤的配制：称量10 g蛋白胨、5 g牛肉膏、5 g氯化钠，混合溶解于1 000 mL蒸馏水中并煮沸，校正pH值至7.0～7.2，装于锥形瓶中经121 ℃灭菌 15 min，冷藏备用[4]。营养琼脂（NA）、麦康凯培养基（MAC）、伊红-美蓝培养基（EMB）、SS琼脂培养基、亚硫酸铋琼脂（BS）成品按说明配制，备用。 　　1.2.2病料的采集用无菌棉拭子插入病犬直肠，旋转取其粪便，迅速放入装有灭菌营养肉汤的5支试管内，封盖贴标签，放入37 ℃恒温箱中增菌培养18～24 h。 　　1.2.3细菌的分离培养取少量用肉汤培养基培养24 h的菌液，在NA培养基上划线分离，置于37 ℃恒温箱中培养 18～24 h，再挑取单菌落在普通琼脂培养基上划线分离、培养。如此反复，直到培养基上的菌落特征相同时，再挑取单个菌落涂片，染色并镜检[5]，观察菌体大小、染色特征；并分别接种于EMB、MAC、SS、BS培养基