瑶药岗松抗佐剂性大鼠关节炎实验研究.docVIP

瑶药岗松抗佐剂性大鼠关节炎实验研究 　　【摘要】目的：观察瑶药岗松根醇提物（BFTE）对大鼠佐剂性关节炎（AA）的药理作用。方法：42只大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤多苷组及BFTE高、中、低剂量组，完全弗氏佐剂诱导AA后，于第12天开始连续灌胃给药16d；同一时间点测定大鼠足趾肿胀度、关节炎评分、免疫器官指数；第29天处死大鼠，酶联免疫法（ELISA）测定大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量，光?W显微镜观察大鼠踝关节的病理变化。结果：与模型组相比，BFTE能够显著抑制AA大鼠的原发性和继发性足跖肿胀度，降低关节炎评分、免疫器官系数，改善大鼠踝关节病理状态，下调AA大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。结论：BFTE对AA大鼠具有良好的治疗作用，其抗炎免疫的机理可能与减少TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌有关。 　　【关键词】瑶药；岗松；类风湿关节炎；佐剂性关节炎；炎症因子 　　【中图分类号】R2827【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0037-05 　　桃金娘科植物岗松（Baeckea frutescens L）为广西瑶族民间习用药材，盘瑶语称“朴老中”，产于我国的南部地区，全株均可入药，具有化瘀止痛、清热解毒、利尿通淋、杀虫止痒的功效，临床用于感冒高热、黄疸型肝炎、胃痛、肠炎、风湿关节痛、脚气病、膀胱炎、小便不利等[1-2]。目前，岗松资源的开发利用仅以地上部分（枝叶）所含挥发油为主，而对地下部分（根）的研究报道较少。课题组对岗松根进行了较为系统的化学研究，分离鉴定Baeckeins A-I共9个新化合物[3-6]，并进行初步的抗炎活性评价。本研究在前期基础上，结合民间用药习惯及文献资料记载，拟对岗松根醇提物抗类风湿关节炎（RA）的药理作用开展研究，并在细胞水平探讨其可能的作用机制。 　　1材料与仪器 　　11实验动物SD大鼠，雄性，体重180～220 g，购自购自河南省实验动物中心，动物合格证号：SYXK（豫）2011-0001。 　　12药品与试剂瑶药岗松采自广西南宁，经广西民族医药研究院戴彬主任医师鉴定为Baeckea frutescens L的根，经95%乙醇提取、回收溶剂得总浸膏（BFTE），使用时用05% CMC-Na溶液的配制成所需浓度。雷公藤多苷片（上海复旦复华药业有限公司）；完全弗氏佐剂（CFA，美国Sigma公司）；TNF-α ELISA试剂盒、IL-6 ELISA 试剂盒和IL-1β ELISA 试剂盒（武汉博士德生物科技有限公司）；甲醛（天津市风船试剂科技有限公司）。 　　13仪器电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；外径千分尺（Radio Shack Corporation）；离心机（上海安亭科学仪器厂）；全自动酶标仪（赛默飞世尔（上海）仪器有限公司）。 　　2方法 　　21AA大鼠模型的制备及分组给药从4 ℃冰箱中取出CFA，充分振荡、混匀；将大鼠右后肢拉直，用75%的酒精消毒，使用l mL注射器于大鼠足跖皮内注射015 mL CFA致炎，正常对照组大鼠注射等体积的生理盐水[7-9]。将42只大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤多苷组、岗松根醇提物高（BFTE-H）、中（BFTE-M）、低（BFTE-L）剂量组，每组7只；于造模后第12天开始灌胃给药，连续给药16 d；雷公藤多苷组给予雷公藤多苷10 mg/kg，BFTE-H、BFTE-M、BFTE-L组分别给予BFTE 60、30、15 g生药/kg/d，正常组及模型组给予等量的05% CMC-Na溶液。 　　22足趾肿胀度于造模前及造模后12、24、36、48h用电子游标卡尺测量大鼠右后足跖厚度，以致炎前后的差值作为大鼠的足趾肿胀度（即足趾肿胀度=致炎后足趾厚度-致炎前足趾厚度）[10-11]，以后每4 d测量一次（即4、8、12、16、20、24、28d），观察AA大鼠原发性和继发性足跖肿胀。 　　23关节炎指数大鼠炎症出现后，每隔4d观察并记录病变程度。病变程度按5级评分法评价：0分-无红肿，1分-关节有红色斑点或轻度肿胀，2分-关节中度红肿，3分-关节重度红肿，4分-关节严重肿胀并伴有功能障碍；累计大鼠各个关节的评分和即为关节炎指数，每只大鼠最多评16分[12]。 　　24细胞因子大鼠继续给药至28d，禁食但不禁水12 h，于第29天称量各组大鼠的体重，用20%乌拉坦（20g/100 mL）腹腔注射麻醉（06mL/100g），腹主动脉取血，凝血后离心分离血清，按照试剂盒说明，采用ELISA法分别测定TNF-α、IL-6、IL-1β的含量[13]。 　　25免疫器官系数于第29d大鼠取血后，摘除胸腺和脾，用生理盐水冲洗后，用滤纸吸除多余的水分