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种子类中药材三维显微结构原位研究 　　[摘要] 目的：将X射线相衬显微CT成像方法应用于中药材显微特征结构的无损、原位研究。方法：利用X射线相衬显微CT的成像优势，对中药材白豆蔻和草豆蔻的种子进行三维无损原位显微成像。结果：无需切片等制备过程，可清晰获得白豆蔻和草豆蔻的种子内部显微结构及其在不同截面方向上的切片信息。结论：同步辐射X射线同轴相衬显微CT方法成像清晰，可以作为原位无损研究中药材内部高分辨率三维显微结构的新方法。 　　[关键词]中药材显微结构；原位无损成像；X射线显微CT；同步辐射 　　中药材的显微研究对中药材优良品种的选育、研究中药材生理特性、鉴定中药材品种和质量、提高其质量标准以及对中药资源的保护均可提供研究依据[1-2]。目前显微结构研究主要有显微测量、透射电镜、扫描电镜与X射线能谱分析联用等诸多方式和方法[3]。利用以上方法进行显微构造研究可以获得高分辨率的二维显微信息，但是对实验前期样品制备的要求很高，需要对样品采用石蜡切片[4]、样品表面导电处理等制备方法，由于其操作程序复杂、耗时耗材，因此提高了中药材样品制备的难度，且只能获得样品的表层信息、部分切片信息或粉末的显微结构信息[5]。因此如何省去复杂的样品制备流程，避免化学试剂对中药材内部结构的破坏，以及达到无损原位三维成像研究中药材显微结构的目的，是目前中药材显微结构研究发展的新需要。 　　尤其面对难于进行切片制备、同时其内部显微结构又具有三维分布特点的中药材种子而言，三维无损原位的显微成像方法是其显微结构研究的理想选择，它对于区别不同来源的植物种子及伪品的研究都有重要的意义。以中药材白豆蔻和草豆蔻的种子研究为例，由于在植物分类和药效成分上均表明2种中药材的来源不同、所含有的化学成分也有所区别[6]，因此药用功效相异，不可通用或互为代用；但是姜科果实及种子类中药材的外部形态、气味又非常相近，所以存在难于辨别、容易混淆使用的情况[7]。而其药用功效迥异的原因，主要归结于所含有的挥发油成分不同。如姜科果实及种子类中药材内部普遍具有的分泌和存储挥发油的油细胞结构，在经过传统样品切片制备的过程中，需要经历化学试剂透化处理，这使得油细胞结构受到破坏多不完整，所观察到的油细胞中含有的挥发油成分也已被化学试剂所改变，不能够观察到其真实的贮藏和分布情况[8]。因此在中药材显微结构研究中，针对这一类容易被化学试剂所破坏的显微构造（如对油细胞等含有挥发油成分的显微结构），三维无损原位显微成像方法的使用可以弥补传统显微研究方法的弊端。 　　近年来，将X射线相衬成像方法应用于中药材显微结构鉴别方面的研究已初有成效[9-14]。因此对中药材的无损原位显微结构研究，可以通过同轴X射线相衬CT （In-line X-ray phase-contrast computed tomography， IXPCT）方法[15]的无损成像优势来获得解决。该方法对样品只需进行干燥处理，无需切片、粉末等制备要求，且可从多视角对其内部显微结构进行数字切片研究，成像结果清晰、分辨率高、直观立体。本文利用具有高亮度的同步辐射光源对亟需进行原位无损显微结构鉴别的中药材白豆蔻和草豆蔻的种子进行成像研究，为中药材原位、无损高分辨三维显微鉴定研究探索一条新途径。 　　1材料 　　1.1样品 本文以姜科Zingiberaceae砂仁属Amomum Roxb.植物白豆蔻A. kravanh Pierre ex Gagnep.和山姜属Alpinia Roxb.植物草豆蔻A. katsumadai Hayata为研究目标。分别选取中药白豆蔻Fructus Amomi Rotundus和草豆蔻Semen Alpiniae Katsumadai内的干燥成熟种子作为实验研究对象。实验样本由上海中医药大学倪梁红老师采集于夏秋间果实成熟时节并通过原植物鉴定，且凭证标本保存于上海中医药大学标本馆。考虑本科植物多含挥发油，所以样品预处理过程经低温干燥处理，目的确保可以固定其内部各组织结构形态的同时也可以尽量减少其内部挥发油成分的挥发。以形态饱满蒴果中的饱满种粒作为实验样本的选取标准，并将其固定于IXPCT成像实验的样品平台上，即可进行实验数据采集。 　　1.2仪器 实验于第三代同步辐射装置-上海光源（SSRF） X射线成像及生物医学应用光束线站（BL13W1）上完成。实验光路系统及相关实验装置仪器示意图见图1。BL13W1为采用Wiggler插入件的光束线站，采用液氮冷却的两种双平晶单色仪[Si（111），Si（311）]，可提供8～72.5 keV能段的准平行、高相干性，高通量的单色X射线源，光源最大束斑尺寸为48 mm（H）×5 mm（V）。搭建IXPCT实验平台，其光源点到样品台原点的距离为34 m，探测器