细胞外信号调节激酶2在结肠癌中表达及临床意义.docVIP

细胞外信号调节激酶2在结肠癌中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 研究细胞外信号调节激酶-2（ERK-2）在结肠癌组织中的表达及临床意义。 方法 选取山东省临朐县人民医院2008年1月～2010年12月经手术病理证实的结肠癌患者79例，采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（streptavidin-peroxidase，SP）法检测正常结肠组织、癌旁组织和结肠癌组织中ERK-2蛋白阳性表达情况；分析ERK-2蛋白表达与结肠癌临床病理特征及预后的关系。 结果 ①结肠癌组织中ERK-2蛋白阳性表达率[75.9%（60/79）]高于癌旁组织[51.9%（41/79）]及正常组织[13.9%（11/79）]，差异均有统计学意义（P 0.05）；ERK-2蛋白阳性表达率在不同分化程度（高、中分化/低分化）[82.8%（48/58）、57.1%（12/21）]、浸润深度（未穿透肌层/浆膜或浆膜外）[46.2%（6/13）、72.7%（48/66）]和淋巴结转移（阳性/阴性）[76.5%（26/34）、53.3%（24/45）]因素间比较，差异有统计学意义（P 0.05）；ERK-2蛋白阳性表达患者24个月生存率（38.7%）低于ERK-2蛋白阴性表达患者（58.6%），差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 ERK-2蛋白阳性表达与结肠癌多种临床病理因素有关，检测ERK-2蛋白对结肠癌的诊疗有一定意义。 　　[关键词] 结肠癌；细胞外信号调节激酶；免疫组织化学 　　[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（b）-0010-04 　　结肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，仅2000年全球即有945 000例新发病例，仅次于肺癌、乳腺癌，居恶性肿瘤发病率的第3位[1]。结肠癌病因不明，预后较差，5年存活率不超过40%。目前结肠癌的病因尚不清楚，早期诊断成为改善患者预后的关键[2-3]。在结肠癌的生物学行为中，侵袭和转移是影响结肠癌患者疗效和预后的重要因素。寻找有关控制侵袭、防止浸润的因素是目前结肠癌防治研究的重要课题之一。因此，本研究应用免疫组织化学方法，研究细胞外信号调节激酶（ERK）在结肠癌与癌旁组织中的表达情况，分析ERK蛋白与结肠癌病理因素的关系，探讨ERK在结肠癌发生中的作用。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集山东省临朐县人民医院2008年1月～2010年12月经手术病理证实的结肠癌79例患者的结肠癌组织及癌旁组织标本，所有患者的年龄、性别、肿瘤部位、组织学类型、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结或远处转移情况、Dukes分期等病理资料完整、可查。在79例结肠癌患者中，男41例，女38例；60岁者40例，≥60岁者39例；结肠癌位于右半结肠35例，位于左半结肠49例；肿瘤直径5 cm者36例，≥5 cm者43例；Dukes A期14例，B期31例，C期22例，D期12例；高中分化腺癌58例，低分化腺癌21例；无淋巴结转移45例，有淋巴结转移34例；浸润深度：未穿透肌层者13例，浸润至浆膜或浆膜外者66例；癌胚抗原（CEA）水平5 μg/L者22例，≥5 μg/L者57例。另选择同期行结肠切除的79例非肿瘤患者组织标本作为正常组织对照，其中，溃疡性结肠炎39例，肠结核11例，外伤29例。本研究经医院伦理委员会通过，患者知情同意，并签署知情同意书。 　　1.2 ERK-2蛋白表达检测方法 　　采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（streptavidin-peroxidase，SP）法检测ERK-2蛋白表达情况。对石蜡切片常规脱蜡脱水处理，放置于3%过氧化氢（H2O2）溶液中，室温孵育约30 min，给予磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤5 min×2遍，滴加正常山羊血清封片40 min，而后滴加1∶30稀释的ERK-2抗体，置于4℃条件下孵育过夜；第2天取出切片，PBS冲洗，依次滴加生物素标记羊抗鼠二抗及链霉卵白素，37℃条件孵育30 min；采用二氨基联苯胺（DAB）显色，复染采用苏木精，乙醇脱水、二甲苯透明化，最后采用中性树胶封片保存。采用HPLAS-1000彩色病理图像免疫组化测量系统7.0版对图像进行分析，判断ERK-2表达情况。 　　1.3 结果判定 　　ERK-2蛋白免疫组化阳性表达于细胞质和（或）细胞核，呈黄色或棕黄色颗粒。每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个瘤细胞，根据阳性细胞总数计算阳性细胞百分率。按着色强度不同分别给予计分：无色为0分，浅黄色或黄色为1分，棕黄色为2分。阳性细胞数评分分别为：50%为2分。两项合计乘积0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（+），4分为强阳性（++）。 　　1.4 统