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细胞类固醇合成酶影响 　　二甲磺酸乙烷对成年大鼠睾丸间质不同时间点 　　[摘要] 目的 研究二甲磺酸乙烷（EDS）注射对雄性大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶表达的影响，并进一步了解EDS对大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶可能的调节机制。 方法 将25只90 d雄性SD大鼠随机分为两组，对照组（0 d，n = 5）一次性腹腔内注射生理盐水，EDS组（n = 20）一次性腹腔内注射EDS 70 mg/kg体重。EDS组注射后7、21、35、90 d后取血清和睾丸组织，用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清及睾丸中的睾酮水平，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹方法（Western blot）分别检测睾酮合成相关基因类固醇急性调节蛋白（StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β-羟基类固醇脱氢酶1型（3β-HSD1）、P45017α-羟化酶1（P450c17a1）、17β-羟基类固醇脱氢酶3型（17β-HSD3）mRNA和蛋白表达水平。 结果 与对照组比较，EDS处理7 d后，睾丸内的睾丸间质细胞几乎完全被破坏，导致睾酮水平急剧下降（P 0.05）。 结论 EDS能够特异性地破坏雄性SD大鼠睾丸组织中的睾丸间质细胞，EDS的此种效应对研究睾丸间质细胞缺失下睾丸功能的变化进而研究精子发生的内分泌调控均有较大意义。 　　[关键词] 睾丸间质细胞；二甲磺酸乙烷；睾酮；类固醇合成酶 　　[中图分类号] R339.21 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）02（c）-0015-04 　　睾丸间质细胞（Leydig cell）是哺乳动物睾丸?g质中的一种重要的内分泌细胞，具有合成和分泌体内超过90%睾酮的功能，对于雄性的生育能力及第二性征的维持至关重要，是男性体内雄激素的最主要来源。Leydig的发育、数量及雄激素合成功能对男性的各个方面都具有决定性的影响[1]。二甲磺酸乙烷（ethane dimethane sulfonate，EDS）作为一种细胞毒性烷化剂，在20世纪80年代即已证实可以选择性地杀死成年大鼠睾丸中的Leydig细胞，被认为是研究Leydig细胞再生的候选药物之一[2-3]。目前，国外采取EDS建立模型研究Leydig细胞再生及其相关研究的报道较多[4-7]，但国内报道相对较少，因此，本研究通过观察一次性腹腔注射EDS对成年大鼠Leydig细胞的作用，测定EDS对处理后不同时间点大鼠睾丸Leydig细胞类固醇关键合成酶类固醇合成快速调节蛋白（StAR）、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β-羟类固醇脱氢酶1（3β-HSD1）、P45017α-羟化酶1（P450c17a1）、17β-羟类固醇脱氢酶3（17β-HSD3）在转录水平和翻译水平表达的影响，为利用EDS建立体内Leydig细胞再生模型的建立提供基础实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与主要试剂仪器 　　90 d SPF级健康雄性SD大鼠，体重250～280 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK京2012-0001。主要试剂：EDS（纯度97%，洛克菲勒大学Renshan Ge教授惠赠）；睾酮酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂盒（武汉华美生物工程有限公司）；RNA提取试剂盒（美国Omega公司）；逆转录试剂盒（美国Promega公司）；SYBR Green试剂盒（美国Promega公司）；PCR引物（上海生物工程有限公司）；抗体（美国Abcam公司）。主要仪器：荧光定量PCR仪（美国ABI公司）；台式低温高速离心机（德国Sigma公司）；超微量核酸蛋白测定仪（美国Thermo Fisher公司）；全自动酶标仪（美国Molecular Devices公司）等。 　　1.2 实验方法 　　将25只实验大鼠随机分为两组，对照组（0 d，n = 5）一次性腹腔内注射生理盐水，EDS组（n = 20）一次性腹腔内注射EDS 70 mg/kg体重；EDS组注射后于第7、21、35、90天结束，于相应时间点固定时间处死大鼠（每组5只），采集血清和睾丸组织，用ELISA测定血清中及睾丸中的睾酮水平，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹方法（Western blot）分别检测睾丸组织内睾酮合成相关基因StAR、P450scc、3β-HSD1、P450c17a1、17β-HSD3基因和蛋白表达水平。 　　1.3 统计学方法 　　本文数据采用Graphpad Prism 5.0统计软件进行分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差（One-way ANOVA）分析，组间两两比较采用Dunnett检验，以P