白介素12基因瘤内转导治疗原发性肝癌的实验研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 4 白介素 12 基因瘤内转导治疗原发性肝癌的实验研究 中文摘要 目的：1、建立人 HCC-hu-PBL-NOD/SCID 小鼠复合模型；2、探讨白细胞介素 12 基因瘤内注射对肝癌荷瘤小鼠的治疗效果，并分析可能的机理。 方法：1、NOD/SCID 小鼠皮下注射 HepG2 细胞，成瘤后腹腔注射人外周血淋 巴细胞，构建人 HCC-hu-PBL-NOD/SCID 小鼠复合模型；2、随机将模型小鼠 分为三组，在第 1、4、7 天分别瘤内注射经致死量射线照射的转染有人 IL-12 基 因的肺癌细胞株 9597/IL-12、空载体肺癌细胞株 9597/plasmid 和 PBS；3、观 测小鼠瘤体积的变化，以及小鼠体重、一般状况的变化，计数外周血中白细胞数， ELISA 法检测 ALT、AST 水平；4、CBA 和 ELISA 检测外周血和瘤块中 Th1/Th2/Th17 类细胞因子和 IL-12 水平；5、流式细胞术检测瘤块中细胞周期和 凋亡情况；6、免疫组化法检测瘤块中免疫细胞和微血管密度。 结果：1、皮下注射 HepG2 细胞并腹腔内注射人 PBL 后 NOD/SCID 小鼠总体成 瘤率 100%，HE 染色观察瘤块镜下结构，可见小鼠肿瘤组织结构、细胞形态特 点与人肝癌组织结构相类似，肿瘤微环境中存在人淋巴细胞（CD3+ T 细胞 5.63 ±3. 48 个/ HP，CD4+ T 细胞 3. 21±2. 83 个/ HP，CD8+ T 细胞 1. 18±2. 20 个/ HP） 和细胞因子（I L- 2 为 4. 11±0. 80pg/ ml ，I L- 4 为 4. 24±0. 98pg/ ml ，I L- 6 为 3. 12 ±0. 43pg/ ml ，I L- 10 为 2. 86±0. 54pg/ ml ，TNF 为 5. 32±0. 63pg/ ml ，I FN- γ为 11. 19±2. 36pg/ ml ，I L- 17A 为 85. 37±12. 21pg/ ml ）；2、治疗组小鼠在瘤内注射 后肿瘤生长明显受到抑制，第 28 天时瘤体积为 956.51±257. 27mm3，小于空载 体组和对照组；3、治疗组小鼠在治疗期间体重与空载体组、对照组小鼠无明显 差异（P0.05）；4、小鼠外周血中的白细胞数在瘤内注射后第 7 天，治疗组（9.32 ±1. 93×109 个/L）高于空载体组（7.74±1. 74×109 个/L）和对照组（7.38±1. 37 ×109 个/L），第 21 天治疗组（8.04±1. 46×109 个/L）、空载体组（7.97±1. 20 ×109 个/L）高于对照组（6.42±1. 68×109 个/L），第 28 天三组之间无明显差异 （P0.05）；5、三组小鼠外周血 AST 水平不存在明显差异（P0.05），治疗组 小鼠 ALT 水平在第 14 天升高（78.76±20.33IU/L），第 28 天恢复（35.56± 16.20IU/L）；6、治疗组小鼠外周血中 IL-12 在第 7 天（13. 82±9. 15pg/ ml ）、 14 天（9. 08±3. 41pg/ ml ）、21 天（3. 13±2. 36pg/ ml ）、28 天（2. 24±1. 44pg/ ml ） 高于另两组小鼠，I L- 2 和 I FN- γ在第 21 天（分别为 4. 94±2. 66 pg/ ml ， 5. 63±1. 97 pg/ ml ）高于另两组小鼠；7、肿瘤微环境中，治疗组小鼠 I L- 2、I FN- γ、I L- 12 水平（分别为 5.71±1.94pg/ml，12.61±4.29pg/ml，3.06±1.05pg/ml） 高于空载体组和对照组，而 IL-17A 水平（67.40±16.51pg/ml）相反；治疗组小 鼠 CD3+ T 细胞（9.18±3.72 个/HP）、CD4+ Th 细胞（5.62±2.15 个/HP）、IFN- γ+ Th1 细胞（4.22±1.59 个/HP）、S-100 +树突状细胞（10.24±3.39 个/HP） 水平较另两组小鼠高，MVD（4.32±2.04 个/HP）较之比低；8、治疗组小鼠肿 瘤组织中 G0/G1 期比例上升，S 期比例下降，且均较对照组小鼠有统计学差异 （P0.05），且治疗组小鼠瘤块中凋亡细胞比例（25.54±7.13%）较另两组多（分 别为 12.42±3.62%，17.31±3.32%）。 结论：1、NOD/SCID 小鼠皮下注射 HepG2 细胞，成瘤后腹腔注射人 PBL，可 以成功构建人 HCC-hu-PBL- NOD/SCID 复合模型，以模拟人肝癌组织微环境； 2、人 IL-1