半夏泻心汤含药血清抑制胃癌细胞上清对人腹膜间皮细胞损伤的分析-方剂学专业论文.docxVIP

5.3 HGF 在胃癌腹膜转移中的作用 35 5.4 TGF-β与胃癌腹膜转移 35 5.5 Bcl-2 及 Bax 蛋白的意义 36 5.6 氧化应激与腹膜间皮细胞37 5.7 半夏泻心汤含药血清对间皮细胞的影响37 结 语39 参 考 文 献40 致 谢48 附 录 一49 附 录 二54 半夏泻心汤含药血清抑制胃癌细胞上清对人腹膜间皮细胞损伤的影响 半夏泻心汤含药血清抑制胃癌细胞上清对人腹膜间皮细胞损伤的影响 PAGE PAGE 1 摘 要 目的：通过研究半夏泻心汤含药血清抑制胃癌细胞（BGC-823）上清对人腹膜间皮 细胞（HMrSV5）损伤的影响，探讨半夏泻心汤含药血清干预胃癌腹膜转移的作用及其 相关机制。 方法：收集胃癌细胞（BGC-823）分泌的上清液与人腹膜间皮细胞（HMrSV5）共 培养在正常兔血清基后分别用 100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL 浓度的半夏泻心汤含药 兔血清进行干预。实验分组为对照组（正常腹膜间皮细胞），模型组（接触胃癌细胞上 清的腹膜间皮细胞），100ul/mL、200ul/mL、400ul/mL 半夏泻心汤含药血清组。（1） 光镜下观察各组细胞形态及细胞结构的变化；（2）MTT 法检测各组细胞的生长活性； （3）流式细胞仪及荧光染色检测各组细胞增殖凋亡变化；（4）检测各组细胞上清氧化 应激指标 SOD、MDA、GSH 的水平；（5）Western Blot 法检测各组细胞中 Bcl-2、Bax、 TGF-β1 蛋白含量的变化；（6）ELISA 法检测各组细胞上清中的 TGF-β1 蛋白的表达。 结果：（1）接触胃癌细胞上清的间皮细胞随着半夏泻心汤含药血清浓度的 2 倍递 增，形态由松散细长的纤维状逐渐的变圆呈紧密排列，细胞间骨架由细小的微丝逐渐变 多裸区逐渐消失； （2）荧光染色显示接触胃癌细胞上清后的间皮细胞颜色多为橙红色并有核破裂现 象，随着药物血清的干预细胞凋亡率随着药物浓度的递增逐渐下降； （3）经胃癌上清干预后的间皮细胞 MTT 还原能力低于其他组别，随着药物浓度的 递增，受胃癌上清干预后的腹膜间皮细胞还原能力逐渐递增； （4）氧化应激指标显示对照组中 MDA 水平最低，SOD、GSH 水平最高，100ul/mL、 200ul/mL、400ul/mL 半夏泻心汤含药血清组中 MDA 的水平由高到低依次排列但均低于 模型组，SOD、GSH 水平均高于模型组； （5）流式细胞术检测结果显示接触胃癌上清的间皮细胞与对照组相比，G0/G1/G2/M 比例由 53.5%增长至 79.3%，S 期比例由 46.5%降低至 20.7%，不同浓度的含药血清组与 模型组相比 G0/G1/G2/M 比例，随着浓度的递增有逐渐降低的趋势，S 期比例逐渐升高； （6）免疫印迹法检测结果显示，胃癌上清能够诱导腹膜间皮细胞低表达 Bcl-2 高表 达 Bax、TGF-β1 蛋白，经半夏泻心汤药物血清干预后 Bcl-2 蛋白表达有所上升，Bax 及 TGF-β1 蛋白表达随着药物浓度的递增逐渐降低并呈浓度依赖性； （7）ELISA 法检测结果显示接触胃癌上清的间皮细胞 TGF-β1 含量与对照组相比明 显升高；100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml 半夏泻心汤药物组，TGF-β1 蛋白含量呈逐渐下 滑趋势但均高于对照组且明显的低于模型组。 结论：半夏泻心汤含药血清可抑制胃癌细胞上清对腹膜间皮细胞的损伤，并呈明显 的浓度依赖性，此作用机制可能与抗氧化应激，上调 Bcl-2 抑制 Bax 表达及抑制 TGF-β1 蛋白分泌有关。 关键词：半夏泻心汤；胃癌；人腹膜间皮细胞；腹膜癌转移；含药血清 ABSTRACT Objective: By studying the effects of Banxia Xiexin Decoction medicated serum on inhibition of gastric cancer cells(BGC-823) in fluids to injury the (HMrsv5) cells-a human peritoneal mesothelial cell line, to explore the effect of Banxia Xiexin Decoction medicated serum intervention in gastric cancer peritoneal metastasis and its related mechanism. For the Banxia Xiexin Decoction medicated serum inhibition of gastric cancer cells i