半夏泻心汤含药血清对人胃癌腹膜转移细胞凋亡及侵袭的影响-方剂学专业论文.docxVIP

5.5 半夏泻心汤含药血清干预 GC9811-P 细胞凋亡及侵袭迁移的机理 33 5.5.1 TGF-β1 与胃癌腹膜转移 33 5.5.2 VEGF 与胃癌腹膜转移 34 结 语 37 参 考 文 献 38 致 谢 47 附 录 1 在校期间成果 48 附 录 2 49 半夏泻心汤含药血清对人胃癌腹膜转移细胞凋亡及侵袭的影响 半夏泻心汤含药血清对人胃癌腹膜转移细胞凋亡及侵袭的影响 PAGE PAGE 1 摘 要 目的：通过半夏泻心汤含药血清干预人胃癌腹膜转移细胞 GC9811-P，研究 被干预后细胞的凋亡，侵袭及 TGF-β1、VEGFmRNA 和蛋白的表达水平。探讨 半夏泻心汤干预胃癌腹膜转移的机制，为中医药治疗肿瘤提供实验依据。 方法：4 只家兔分别灌服半夏泻心汤和生理盐水，无菌条件下心脏采血，将 含药血清配制成 25 μL/mL、50 μL/mL、100 μL/mL 的浓度干预 GC9811-P 细胞， 用 RTCA 检测血清干预后细胞的生长及迁移，流式细胞术检测细胞凋亡及细胞 周期，激光共聚焦显微镜下观察经罗丹明 123 染色后的各组细胞数目及线粒体 膜电位变化，RT-PCR 检测 TGF-β1、VEGFmRNA 的表达，Western blot 检测 TGF-β1、VEGF 蛋白的表达水平。 结果：根据实验结果显示，与空白血清组相比，GC9811-P 细胞经过不同浓 度的半夏泻心汤含药血清(25、50、100μL/mL)处理后，细胞增殖受到明显抑制。 RTCA 实时动态检测表明，对照组(SF 组)，即下室中没加血清的，GC9811-P 细 胞基本没有发生迁移，其它经过不同浓度半夏泻心汤含药血清( 0、3.1、6.2、 12.5、25、50、100 μL/mL)干预的各组 GC9811-P 细胞均发生了迁移，至 23h 时， 迁移能力无明显差异(P＞0.05)，23h 后，25、50、100 μL/mL 的半夏泻心汤含 药血清能显著抑制其迁移能力。而通过细胞流式图可以看出与空白血清组相比， 半夏泻心汤含药血清低剂量组(25 L/mL）、中剂量组（50 μL/mL）、高剂量组 （100 μL/mL）的细胞位于 G2/M、S 期的百分比降低，随着药物浓度的增大， 效应越明显。激光共聚焦显微镜图片看出与空白血清组相比，各个剂量组细胞 内荧光强度减弱，线粒体膜电位降低，且药物血清浓度越高，强度越弱，膜电 位越低。RT-PCR 及 Western blot 结果显示，半夏泻心汤含药血清可以下调 VEGF 的 mRNA 的表达，随着半夏泻心汤含药血清浓度的升高，TGF-β1 和 VEGF 的 蛋白表达均下降。 结论：半夏泻心汤含药血清可以抑制人胃癌腹膜转移细胞 GC9811-P 的凋亡 和侵袭，并呈明显的效应-剂量关系，其机制可能与抑制 TGF-β1 和 VEGF 的分 泌有关。 关键词：半夏泻心汤；含药血清；胃癌腹膜转移；凋亡；侵袭 Abstract Objective:through the Banxiaxiexin soup medicated serum intervention in human gastric cancer peritoneal metastasis GC9811-P cells,to study the GC9811-P cells’ growth,migration,apoptosis and TGF-beta1,VEGFmRNA and protein expression level after the tumor micro-environment being induced.Discussing Banxiaiexin soup intervention mechanism of peritoneal metastasis of gastric cancer,provide experimental basis for traditional Chinese medicine treatment of tumor. Methods:four rabbits were respectively irrigated Banxiaxiexin soup and physiological saline,getting blood from the hearts in sterile conditions.Mixture the medicated serum into the concentration of 25μL/mL,50μL/mL and100μL/mL to intervene the GC9811-P cells.With RTCA testing the cells g