斑马鱼cd36可与细菌及病原相关分子模式结合并受脂肪酸诱导表达-生物工程专业论文.docxVIP

斑马鱼 斑马鱼 CD36 可与细菌及模式识别分子结合并受脂肪酸诱导表达 万方数据 万方数据 独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成 果 ， 也 不 包 含 未 获 得 （注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 斑马鱼 斑马鱼 CD36 可与细菌及病原相关分子模式结合并受脂肪酸诱导表达 I 斑马鱼 CD36 可与细菌及病原相关分子模式结合并受 脂肪酸诱导表达 摘 要 清道夫受体(SRs)是一种细胞表面的跨膜糖蛋白，属于受体超基因家族，在 哺乳动物病原体识别和防御中起到重要作用。近期研究表明 SRs 同系物在斑点 叉尾鮰、虹鳟、大西洋鳕鱼等硬骨鱼中也存在，但对其特性和功能的认识依然有 限。而且同哺乳动物相比，鱼类在免疫应答中的作用机制并不完全相同。所以有 必要对鱼类 SRs 进行深入研究，以加深对其在鱼类病原体识别和清除中所扮演 的角色和在生物进化中功能的演变的认识。为此，我们以斑马鱼中一种 B 类清 道夫受体 CD36 为对象，探索了其在先天免疫应答中的作用。 首先我 们以 RAW264.7 细胞 系为 对象 ，将 斑马鱼 CD36 基因 ORF 与 pcDNA?3.1/V5-His A 构建为 pcDNA-CD36 真核载体，并将其转染进 RAW264.7 细胞，然后通过 LPS 和 LTA 进行刺激，实时定量 PCR 结果显示 LPS 和 LTA 两 种分子均能诱导 CD36 mRNA 的表达量升高，表明其在细胞免疫防御中发挥作 用。为进一步探索斑马鱼 CD36 在天然免疫中的作用，我们又以前期构建的 pET-28a/CD36 重组质粒为基础，对 rzCD36 进行了大量诱导表达和纯化，并通过 Western Blot 和质谱分析进行了鉴定，确定表达的重组蛋白即为斑马鱼 CD36 的 胞外功能域。我们通过 Western Blot 和 FITC 荧光标记两种方法研究了重组蛋白 rzCD36 与革兰氏阳性菌 S. aureus 和革兰氏阴性菌 E. coli 的结合情况，实验结果 表明 rzCD36 与这两种细菌均能够发生结合。为深入研究斑马鱼 CD36 对外源性 病原分子的识别作用，我们通过 ELISA 技术研究斑马鱼重组蛋白 rzCD36 与革兰 氏阳性细菌胞壁成分磷壁酸（LTA）、革兰氏阴性细菌壁成分脂多糖（LPS）的结 合情况，结果表明 rzCD36 与这两种成分均有较强的结合能力。实验结果证明斑 马鱼 CD36 能够结合细菌及 LPS 和 LTA，暗示 SRs 在鱼类中也扮演着对细菌发 挥识别和清除作用的角色。 此外，我们在细胞系体外实验中发现长链脂肪酸 LA 能够诱导斑马鱼 CD36 mRNA 上调表达，为进一步探索 CD36 在斑马鱼脂肪酸代谢和免疫调节之间是否 起到桥梁作用奠定了基础。 关键词：斑马鱼，CD36，清道夫受体，免疫 II Zebrafish CD36 binds to bacteria and PAMP and its expression can be induced by fatty acids Abstract The scavenger receptor (SR) is one subfamily of the pattern recognition receptor (PRR) family, which is involved in th