芳胺―甘二肽钴配合物超氧化物歧化酶活性及其与人血清白蛋白相互作用研究.docVIP

芳胺―甘二肽钴配合物超氧化物歧化酶活性及其与人血清白蛋白相互作用研究 　　摘 要 以甘氨酰甘氨酸（Glygly）为第一配体，2，2′联吡啶（2，2′bpy）、4，4′联吡啶（4，4′bpy）和邻菲罗啉（Phen）为第二配体，与金属钴和镍的硝酸盐作用，合成了6种新的金属配合物，采用红外光谱方法、元素分析、差热热重和核磁共振等方法对其进行了表征。并通过氯化硝基四氮唑蓝（Four nitrogen chloride nitro blue， NBT）光照还原法测试了配合物的 超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase， SOD）活性。为探讨配合物在血液中的行为，用荧光光谱法研究了配合物和人血清白蛋白（human serum albumin， HSA）之间的相互作用。结果表明：所合成的配合物的化学组成为＼[M（Glygly）（2，2′bpy/Phen）（H2O）＼]?2H2O 和[M2（Glygly）2（4，4′bpy）（H2O）4]?4H2O 。6种配合物均具有良好的SOD活性和较好的细胞相容性，IC50值的范围为0.327～0.564 μmol/L。 与HSA作用的结果表明，配合物可与HSA分子作用生成复合物，可以通过HSA输送配合物，在生物体内发挥其作用。 　　关键词 甘二肽； 芳胺； 配合物； 超氧化物歧化酶活性； 人血清白蛋白 　　1 引 言 　　超氧化物歧化酶（SOD）是一类广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，作为生物体内自由基的清洁剂，SOD对生物体具有重要的功能作用。天然 SOD 有许多不足之处，如分子量大、稳定性低、膜透性差、易受胃蛋白酶分解和价格昂贵等，使其应用受到较大的限制。因此设计和合成既能避免天然酶自身不足，同时又具有较高 SOD 活性的小分子 SOD 模拟物，已成为生物化学领域的研究热点之一[1～3]。由于二肽在生物体内具有良好的生理活性，作为配体能有效提高生物利用率和配合物的生物活性，降低毒副作用，SOD 模拟物中以二肽和芳胺为配体的铜配合物的研究报道较多[4]，例如，丁杨等[5]合成的二肽铜多吡啶三元配合物表现出了良好SOD活性，可作为SOD模拟物；Tabassum等[6]合成的＼[Cu2（Glygly）2（ppz）（H2O）4＼] ?2H2O配合物具有对DNA分子的氧化切割作用，对拓扑异构酶I也具有很好的抑制作用，同时还具有很小的SOD活性的IC50值，该配合物具有较好的应用前景。为了探索其它过渡金属的二肽配合物的SOD 活性，本课题组设计合成了未见报道的具有SOD活性的6种Co和Ni的甘氨酰甘氨酸和2，2′bpy，4，4′bpy，Phen为配体的配合物，采用NBT（氯化硝基四氮唑蓝）光照还原法测试了它们的SOD活性，并测试了配合物浓度对其SOD活性的影响。 结果表明，合成的6种金属配合物与文献[7～12]相比，金属配合物有较好的清除超氧自由基的作用。配合物的SOD活性表现出规律性的变化，即随配体中分子平面性的增加而减小。对6种合成的配合物与HSA（人血清白蛋白）分子之间的相互作用采用光谱方法进行了研究。结果表明，配合物与人血清白蛋白相互作用形成了一种新的复合物。配合物与HSA分子结合后，可以被HSA 分子输送，在体内发挥其消除自由基的作用。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　FTS3000 FTIR傅里叶红外光谱仪（DIGILAB公司），TG/DTA6300热重差热分析仪（美国PE公司），LS55荧光分光光度计（美国PE公司），Mercury plus 400超导核磁仪（美国Varian公司），2400CHN型元素分析仪（美国PE公司）。 　　甘二肽（C4H8N2O3，生化试剂，98%，成都蒽?R生物科技有限公司）；2，2′联吡啶（2，2′bpy）、4，4′联吡啶（4，4′bpy）、邻菲罗啉（Phen）、无水乙醇均为市售分析纯试剂；甲硫氨酸（MET）、 核黄素 （VB2） 和氯化硝基四氮唑蓝 （NBT） 为生化试剂，整个实验过程均使用二次蒸馏水。 　　2.2 配合物的合成 　　分别将5 mL 含 0.5 mmol甘二肽的水溶液、10 mL含 0.5 mmol的2，2′联吡啶无水乙醇溶液滴加到5 mL 0.1 mol/L Co（NO3）2溶液中，再用 1 mol/L NaOH 溶液调节至pH 8.0～8.2。 在氮气保护下，80℃回流搅拌3 h，室温搅拌8 h后过滤，滤液室温下静置挥发，数周后析出红色颗粒状晶体，过滤后干燥保存。其它5种配合物的合成方法与之类似。 　　2.3 配合物的SOD活性测试 　　采用 NBT光照还原法测定配合物的SOD活性，用磷酸盐缓冲液（pH=7.8）配制含有以下物质的混合溶液：空白组：3.3×10 　　Symbolm@