芹菜素预处理对缺血再灌注大鼠心肌肿瘤坏死因子α表达影响.docVIP

芹菜素预处理对缺血再灌注大鼠心肌肿瘤坏死因子α表达影响 　　摘要:目的 研究芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响,探讨抗心肌缺血再灌注损伤的可能机制。方法 将Wistar大鼠随机分为5组，假手术组、缺血再灌注对照组、溶剂对照组、芹菜素低剂量组、芹菜素高剂量组。采用结扎左冠脉前降支制作缺血再灌注模型，心肌缺血30 min，再灌注2 h。心肌苏木素碱性品红苦味酸（Hematoxylin basic fuchsin picric,HBPF）染色观察心肌形态学改变，免疫组化染色检测心肌组织TNF-α的表达。结果 芹菜素组可降低心肌组织TNF-α的表达，与缺血再灌注对照组比较有统计学意义（P0.05）。结论 芹菜素对缺血再灌注心肌的保护作用可能与减少心肌TNF-α的表达有关。 　　关键词：芹菜素；缺血再灌注；肿瘤坏死因子-α 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）07-0834-02 　　 　　芹菜素是黄酮类化合物，广泛存在于多种水果、蔬菜、豆类和茶叶中。芹菜素可以减少氧自由基的生成并对氧自由基、NO 自由基、超氧阴离子自由基等均有一定的清除作用，可抑制脂质过氧化反应，还有抗炎、抑癌、抗病毒、雌激素样等多种药理学作用［1-3］。本研究观察芹菜素预处理对缺血再灌注大鼠心肌组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，研究芹菜素对缺血再灌注心肌的保护作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验药物 芹菜素纯度≥98%，陕西慧科植物开发有限公司，批号：A实验时芹菜素用聚乙二醇400（PEG400）和无水乙醇40 ℃水浴40 min药物溶解后，再用生理盐水稀释为含10%的PEG400和10%的乙醇溶液。 　　1.2 动物 Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重220 g～250 g，购自中国医学科学院实验动物研究所,动物合格证号：SCXK（京）2005-0013。 　　1.3 试剂与仪器 BL-420E+生物机能实验系统、HX-300动物人工呼吸机和BI2000医学图像分析系统（成都泰盟科技有限公司）；即用型SABC（货号SA1022）、TNF-α多克隆抗体等（武汉博士德生物工程有限公司）。 　　1.4 方法 　　1.4.1 模型制作 Wistar大鼠用20%乌拉坦麻醉，仰卧位固定,用BL-420电脑系统连续记录Ⅱ导联心电图。于胸骨左侧2 mm第四肋间开胸，在左心耳根部下缘2 mm处，用5/0医用无损伤缝合针于左心耳下方进针,1号丝线穿过冠状动脉前降支，然后将丝线穿于自制的尖端球形冠脉阻断塑料管。稳定10 min后，股静脉给药。除假手术组不拉紧丝线外，其他组给药后10 min拉紧丝线，观察2 h。实验中以左心室前壁发绀及同步心电图Ⅱ导联ST段增高为结扎成功标志，以左心室前壁由发绀逐渐红润及ST段降低1/2为再灌注的标志［4］。 　　1.4.2 动物分组及给药 Wistar大鼠随机分为5组，每组10只，股静脉给药。假手术组：穿线后10 min股静脉推注生理盐水4 mL/kg，持续观察2 h。缺血再灌注对照组：缺血前10 min股静脉推注生理盐水4 mL/kg。溶剂对照组：缺血前10 min股静脉推注含10%（体积分数）PEG400和10%（体积分数）无水乙醇溶液4 ml/kg。芹菜素低?高剂量组：缺血前10 min分别以2 mg/kg、4 mg/kg股静脉给药。 　　1.4.3 心肌苏木素碱性品红苦味酸（HBPF）染色和TNF-α的免疫组化染色 HBPF染色（缺血缺氧心肌呈鲜红色至深红色,正常心肌呈黄色或黄棕色），另一部分采用链霉亲和素（SABC）免疫组化检测心肌TNF-α的表达。在100倍光镜下通过BI2000医学图像分析系统采集免疫组化图像，每张切片随机采取10个不重叠视野，测量灰度值。 　　1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间差异采用单因素方差分析。采用SPSS 15.0统计软件完成。 　　2 结 果 　　2.1 HBPF染色结果 假手术组全部心肌纤维染为黄色；缺血再灌注对照组和溶剂对照组大部分心肌纤维为阳性染色；芹菜素低剂量组较多心肌纤维为红色，肌纤维呈灶状分布，芹菜素高剂量组个别心肌纤维染为红色，胞浆红色呈点状分布。 　　2.2 心肌组织TNF-α表达 在假手术组心肌组织中仅散在少量表达于心肌细胞浆内。在缺血再灌注对照组、溶剂对照组大量心肌细胞胞浆被染成黄色，颜色深。芹菜素低剂量组有一定量的心肌胞浆黄染，颜色较深。芹菜素高剂量有少量的心肌细胞胞浆被染成黄色，颜色淡染，随着芹菜素剂量的增加颜色逐渐由深变浅。各组与假手术组比较TNF-α表达明显增多（P0.05）；芹菜素低剂量组、芹菜素