萆薢总皂苷对大鼠慢性高尿酸血症和肾小管尿酸转运体1表达影响.docVIP

萆薢总皂苷对大鼠慢性高尿酸血症和肾小管尿酸转运体1表达影响 　　[摘要] 目的：研究萆薢总皂苷对大鼠慢性高尿酸血症的防治作用及对肾脏尿酸转运体1（urate transporter 1，URAT1）表达的影响。 　　方法：90只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、萆薢总皂苷（total saponin of Dioscorea，TSD）高、中、低剂量组（300，100，30 mg·kg-1）、苯溴马隆（10 mg·kg-1）组。以氧嗪酸钾联合乙胺丁醇复制大鼠慢性高尿酸血症模型，第3周开始灌胃给药，每天1次，连续4周，测定血尿酸、尿尿酸、尿酸排泄量、黄嘌呤氧化酶（XOD）活性；RT-PCR法、免疫组化法分别测定大鼠肾小管细胞URAT1 mRNA和URAT1蛋白的表达。 　　结果：模型组大鼠血尿酸水平显著升高，尿尿酸排泄减少，肾脏URAT1 mRNA和URAT1蛋白高表达。TSD能剂量依赖性地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平，增加尿尿酸浓度和尿酸排泄量，降低肾脏URAT1 mRNA和URAT1蛋白的高表达，其作用与苯溴马隆相近；对高尿酸血症大鼠XOD、尿量无明显影响。 　　结论：TSD有明显的抗高尿酸血症作用，可能是通过抑制大鼠肾脏URAT1的高表达而减少尿酸的重吸收。 　　[关键词]萆薢总皂苷；高尿酸血症；尿酸转运体1；黄嘌呤氧化酶高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）是一组嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄障碍所致血尿酸（uric acid，UA）增高的异质性疾病。HUA除与痛风发作密切相关外，流行病学及临床试验发现HUA与多种心血管事件危险因素，如高血压、糖尿病、血脂异常、肥胖等有密切的关系[1-3]。研究表明，UA的排泄受多种基因和蛋白调控，其中，尿酸转运体1（urate transporter 1，URAT1）主要介导尿酸的重吸收，通过与多种单价的有机阴离子和少数无机阴离子交换实现对尿酸的重吸收，其过程不受膜电压和细胞内外pH的影响，是一个电中性的尿酸盐交换子[4-5]。 　　萆薢是临床上治疗痛风和高尿酸血症的常用中药之一，具有利湿浊、祛风湿的功效，含粉背皂苷A、原粉背皂苷A、纤细薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷[6]。目前发现，萆薢及其有效部位具有抗炎、免疫调节、抗肿瘤及对心血管系统的作用[7]。笔者的前期研究表明：萆薢总皂苷（total saponin of Dioscorea，TSD）有明显的抗高尿酸血症作用，其作用机制包括促进尿酸排泄，抑制黄嘌吟氧化酶活性[8]。URAT1在肾脏尿酸盐重吸收的过程中起重要作用，研究发现URAT1为促尿酸排泄药物作用的靶点，TSD很可能通过调节肾脏尿酸转运蛋白，进而促进尿酸排泄，降低血清尿酸水平。本课题采用氧嗪酸钾联合乙胺丁醇复制大鼠慢性高尿酸血症（尿酸排泄减少型）模型，阐明TSD对大鼠高尿酸血症的防治作用及URAT1的影响。 　　1 材料 　　1.1 药品与试剂 TSD由本课题组提供，提取物中总皂苷质量分数为61.2%，文中剂量为提取物量。薯蓣皂苷元对照品（中国食品药品检定研究院，批号111539-200001）。苯溴马隆片（德国赫曼大药厂，批号101111）；氧嗪酸钾（Alderich）；乙胺丁醇（上海信谊天平药业有限公司，批号110815）；尿酸测定试剂盒（上海荣盛生物药业有限公司，批；黄嘌呤氧化酶试剂盒（南京建成生物工程研究所，批；尿酸盐重吸收转运子1抗体（Anti-OAT4L/URAT1，北京博奥森生物技术有限公司）；SP-9000免疫组化染色试剂盒及DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）；Trizol试剂（Invitrogen公司）；逆转录试剂盒（RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit）（Fermentas公司），PCR 扩增套装[宝生物工程（大连）有限公司]，DL2000 DNA Marker（上海生工生物工程公司）；引物采用Prime Primer 5.0软件设计，由上海生工生物工程公司合成。 　　1.2 动物 雄性SD大鼠，体重（200 ± 20） g，SPF级，由安徽省医学实验动物中心提供。合格证号SCXK（皖）2011-002。分笼饲养，自由饮水、饮食。 　　1.3 仪器 7112型优利特生化分析仪（广西桂林优利特有限公司）；PCR仪（Bio-Rad Laboratories，2000Alfred Nobel Drive，Hercules，CA）；BioSens SC810凝胶成像系统（上海山富科学仪器有限公司）；Eppendorf 5430R台式高速冷冻离心机（Eppendorf公司）；Image-proplus图像处理系统；Lei