芪附汤调节ERK12信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化作用和机制.docVIP

芪附汤调节ERK12信号通路改善UUO阳虚证模型肾间质纤维化作用和机制 　　[摘要] 目的：探讨芪附汤改善阳虚证模型鼠肾间质纤维化（RIF）的作用和机制。方法：将大鼠随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、芪附汤组（C组）、依那普利组（D组）。通过腺嘌呤灌胃联合单侧输尿管接扎术（UUO）的方法而建立RIF模型。造模成功后，C，D组大鼠分别经灌胃给予芪附汤水煎液或依那普利悬浊液；其余2组大鼠经灌胃给予蒸馏水，共干预3周。各在药物和蒸馏水干预前和干预后第1，2，3周末，分别称量大鼠体重，并检测24 h尿蛋白排泄量（Upro）、尿β2-微球蛋白（Uβ2-MG）、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）酶。药物干预第3周末，处死全部大鼠，抽取血液，摘除左肾，称重，并留取相应标本，观察肾脏外观和肾小管/间质形态；检测血清环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和尿酸（UA）；检测肾组织中上皮型黏钙蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、细胞外调节激酶（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白相对表达量。结果：芪附汤可以改善模型鼠血清中降低的cAMP和cAMP/cGMP；减少模型鼠升高的Uβ2-MG、尿NAG酶，改善肾间质细胞外基质及其胶原沉积，上调肾组织E-cadherin蛋白表达，下调肾组织α-SMA，TGF-β1，CTGF，p-ERK1/2蛋白表达；但是，对Scr，BUN，UA没有影响。芪附汤改善RIF的作用优于依那普利。结论：芪附汤可以改善模型鼠阳虚证指标以及尿β2-MG、尿NAG酶排泄，它可能是通过上调肾组织E-cadherin蛋白表达，下调肾组织α-SMA，TGF-β1，CTGF以及ERK1/2信号通路中关键信号分子――p-ERK1/2蛋白表达，改善肾小管EMT，从而减轻RIF。 　　[关键词] 肾小管/间质纤维化；芪附汤；肾小管上皮细胞间充质转分化；ERK1/2信号通路 　　研究表明，肾小管上皮细胞间充质转分化（epithelial to mesenchymal transition，EMT）是慢性肾脏病患者形成肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）的主要病变途径[1-3]。EMT是指肾小管上皮细胞在多种致病因素的影响下失去黏附性，并丢失标志性蛋白，如上皮型钙粘蛋白（E-cadherin）而表达间充质细胞的标志性蛋白，如α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA），最终，发生细胞表型转分化而成为肌成纤维细胞（myofibroblast，MyoF）。转分化后的细胞在形态和功能上出现一些特征性改变，尤其是会过度合成和分泌细胞外基质（extracellular matrix，ECM），从而，促进肾间质纤维化的形成和进展[4-5]。单侧输尿管接扎术（unilateral ureteral obstruction，UUO）是国际公认的RIF造模方法，UUO模型鼠与人类RIF病理改变相似[6]。据报道[7-8]，UUO模型鼠具备肾小管EMT的典型特征，如肾小管E-cadherin表达减弱，α-SMA表达增强，转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β1和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）表达上调，ECM过度产生等，而且，这些病变受到包括细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated protein kinase，ERK）1/2通路在内的多条信号通路的调控[9]。据报道[10-11]，一些中药复方或单味中药可以通过调节EMT而改善RIF。芪附汤（Qifu decoction，QFD）是首载于北宋《魏氏家藏》的古方，由黄芪、附子组成，具有“温助肾阳，益气补虚”的功效（《中医方剂大辞典》）。在临床上，QFD可以改善RIF，延缓肾功能减退。然而，迄今为止，其体内的相关作用和机制不甚清楚。因此，笔者借助腺嘌呤灌胃联合UUO的方法建立RIF模型，观察芪附汤对模型鼠EMT的干预作用，试图阐明其通过调节EMT和ERK1/2信号通路的活性而改善RIF的机制。 　　1 材料 　　11 动物 SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠35只，8周龄，体重180～220 g，由南京大学医学院附属鼓楼医院（以下简称鼓楼医院）动物实验中心代购和饲养，合格证号SCXK（苏）2008-0010，所有大鼠均喂予标准饲料，自由饮水，购回后适应性喂养1周。 　　12 药物和试剂 芪附汤原液配制：生黄芪，