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藜麦基因组DNA提取方法比较 　　摘要：为了快速获取高质量的藜麦基因组DNA，采用改良的CTAB法、SDS法和高盐低pH值法等3种方法分别提取藜麦不同组织（叶、茎、根部）的基因组DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定比较所提DNA的质量和产量，同时进行了PCR-SSR、SSCP等分子检测。用不同方法提取藜麦不同组织部位DNA的结果表明：不同提取方法的凝胶检测条带均比较清晰，且无明显降解；改良的CTAB法所提取的DNA产率最高，SDS法其次，而高盐低pH值法最低；不同方法提取的叶片DNA产率均明显高于根部和茎部；改良的CTAB法和高盐低pH值法所提取的DNA质量较好，多酚类化合物和多糖等杂质去除得比较完全。PCR-SSR和SSCP检测结果表明：不同方法和不同组织所提取的DNA均能跑出良好的条带，适合进行后续的分子生物学研究。 　　关键词：藜麦；DNA提取方法；分子检测；SSR；SSCP 　　中图分类号： S512.901 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0042-04 　　收稿日期：2013-08-10 　　基金项目：国家自然科学基金（编号；浙江省重大科技专项计划（编号：2011C12030）；浙江农林大学创新训练计划（编号：201301004）。 　　作者简介：陆敏佳（1992―），女，浙江嘉兴人，研究方向为种子科学。E-mail：1035660826@。 　　通信作者：蒋玉蓉，博士，主要从事植物分子育种和种质创新研究。E-mail：yurongjiang746@126.com。藜麦（Chenopodium quinoa Willd），又称南美藜、藜谷、奎奴亚藜等，是一年生的藜科草本作物，原产于南美洲安第斯山脉海拔2 800～4 200 m的地区，分布于12°N～39°S的范围，在安第斯山脉已有5 000多年的种植历史，被印加人称为“谷物之母”[1]。藜麦蛋白质含量高，具有近乎完美的氨基酸组成，含有较高的钙磷铁，是联合国FAO唯一认定的完美营养食品，被誉为“未来的超级谷物”“营养黄金”“有机谷类之王”等[2-3]。研究表明，长期食用藜麦，对心脏病、高血压、高血糖、高血脂等有很好辅助治疗作用，此外还有增强免疫力、修复体力、补充营养、减肥等功效[4-5]。联合国大会宣布2013为“国际藜麦年”，旨在让世界更多地关注藜麦的生物多样性和营养价值在提供粮食和营养安全等方面所发挥的作用。藜麦的营养和开发利用价值在最近几十年才得到人们的广泛认识和重视。目前，藜麦的研究主要集中在生物学特性[6-7]、化学成分[8-9]、抗逆性等生理学特性[10-11]方面。与国外相比，我国对藜麦的研究还较少，尤其在藜麦分子生物学方面的研究几近空白。获取高质量的DNA样品是植物分子生物学研究的基础，而研究者对不同植物以及相同植物不同部位的DNA提取、处理方法又有所区别[12-16]，目前尚无关于藜麦基因组DNA提取方法的报道。本研究用改良的CTAB法、SDS法、高盐低pH值法3种不同方法分别提取藜麦的幼叶、茎、根部基因组DNA，同时进行SSR和SSCP等分子标记检测，旨在筛选出一种快速、简便且可获得高质量DNA分子的提取方法，为进一步开展藜麦分子生物学研究提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　供试材料为藜麦品种PI596293，由浙江农林大学农学院提供。叶片的采集：取种植于田间的藜麦幼嫩叶片。茎、根部的采集：取PI596293种子置于发芽纸上，在25 ℃气候箱中培养12 d，分别取茎、根部用于DNA提取。 　　1.2主要试剂 　　试验试剂：EDTA、Tris、CTAB、PVP 40、SDS、β-巯基乙醇等均购自Sigma 公司；无水乙醇、氯仿、异丙醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸钾等为国产分析纯；TaqDNA聚合酶、dNTP、DL2000 DNA Marker 购自TaKaRa 公司；引物由华大基因公司合成。 　　1.3DNA提取方法 　　分别取约0.15 g藜麦幼嫩的叶、茎、根于2 mL离心管中（设3次重复），用长柄镊子夹住离心管管盖放入液氮中速冻5 s，取出并用插有玻璃棒的电钻快速充分研磨。 　　1.3.1CTAB法加入600 μL预热的CTAB提取液[含0.1 mol/L Tris-HCl（pH值8.0）、0.02 mol/L EDTA（pH值8.0）、2%CTAB、2%PVP40、1 mol/L NaCl、0.2%β-巯基乙醇]，置于65 ℃水浴50～60 min，期间颠倒混匀数次；冷却至室温后加入等体积的氯仿-异戊醇-无水乙醇（76 ∶4 ∶20），颠倒混匀后于10 000 r/min离心10 min；吸上清液，加2倍体积的冰乙醇颠倒混匀，再将絮状DN