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血管内皮细胞糖萼在大鼠急性肺损伤中作用 　　【摘要】 目的：探索肺血管内皮细胞糖萼在肺损伤中的作用。方法：采用盲肠结扎穿孔法构建大鼠脓毒症急性肺损伤模型。将30只大鼠随机分为3组，A组为空白对照组，B组为脓毒症组，C组为肝素钠预处理脓毒症组。24 h后观察大鼠肺组织病理切片、动脉血氧分压和细胞凋亡指数，ELISA法检测血清中硫酸乙酰肝素酶（HPA）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、硫酸乙酰肝素（HS）和多配体聚糖（Syndecan-1）的含量。结果：与A组比较，B组和C组病理切片均有明显肺损伤表现，动脉血氧分压中氧分压降低，二氧化碳分压升高，细胞凋亡指数较高；与B组比较，C组动脉血氧分压中氧气分压增高，二氧化碳分压降低，细胞凋亡指数较低；ELISA法结果表明，与A组比较，B组和C组HPA、MMP-9含量较少，HS和Syndecan-1含量显著较高；与B组比较，C组HPA、MMP-9较高，HS和Syndecan-1较低，差异均有统计学意义。结论：肺血管内皮细胞糖萼在急性肺损伤进程中起到保护作用。 　　【关键词】 肺血管内皮细胞糖萼； 急性肺损伤； 保护作用 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.3.087 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2018）03-0162-02 　　急性肺损伤（acute lung injure，ALI）是临床上常见的肺部损伤，是呼吸系统最严重的疾病之一，严重时可以导致患者死亡。血管内皮?胞糖萼（endothelial glycocalyx layer，EGL）是一种网状的绒毛结构，覆盖在血管内皮的腔面，主要由氨基葡聚糖（glycosaminoglycan，GAG），蛋白聚糖（proteoglycans，PGs）和膜糖蛋白（glycoproteins）组成。正硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPGs）是内皮细胞糖萼分布最多的糖胺聚糖。脱氧胆酸钠（SDC）是PGs的核心蛋白之一。血管内皮细胞糖萼是血管屏障的重要组成部分，通过改变血管内皮细胞通透性，阻隔中性粒细胞外渗和黏附，提供对血管的保护作用。HPA和MMP-9是糖萼的破坏因素，而硫酸乙酰肝素（HS）和多配体聚糖（Syndecan-1）是糖萼脱落的标志物。HPA是分解HS的酶，MMP-9可以降解Syndecan-1蛋白[1-2]。本研究建立大鼠肺损伤模型，利用肝素钠作为肺内皮细胞糖萼的保护性因素，通过检测肺组织内细胞凋亡数、肺血氧分压状况、血清HPA、MMP-9、HS和Syndecan-1含量及观察镜下肺组织的病理改变情况，对EGL在急性肺损伤中的作用进行探索性的研究，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般材料 　　30只雄性健康SD大鼠（湖北省疾病控制中心提供），体重210～260 g，将大鼠随机分为3组：常规对照组（A组，10只）、常规肺损伤建模组（B组，10只）、肝素预处理肺损伤建模组（C组，10只）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 试剂与药品 血气分析仪（ABBOTT i-STAT），实验中所用试剂购自武汉谷歌生物科技有限公司，细胞凋亡测试盒购自武汉博士德生物工程有限公司，ELISA试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。 　　1.2.2 急性肺损伤大鼠模型 大鼠麻醉用药为3%戊巴比妥钠（40 mg/kg），将所有大鼠注射麻醉后，对C组大鼠经尾静脉注射肝素（2 mg/ml）3 ml/kg进行预处理，对照组注入等量生理盐水，而后按照文献[3]介绍的盲肠结扎穿孔法建造脓毒症肺损伤模型。常规消毒铺巾，沿腹正中切口切开，切口长2～3 cm，打开腹腔，游离肠系膜和盲肠，环形结扎盲肠1/2处，用50 ml注射器9号针头穿孔于盲肠和尾端中点，挤出少许内容物，还纳肠管，保证肠道通畅，对伤口进行逐层缝合。伤口消毒后以5 ml/100 mg生理盐水腹腔注射补液。 　　1.3 观察指标 　　（1）24 h后取大鼠股动脉血0.5 ml血气分析，而后处死大鼠，取右肺上叶1 cm3，4%多聚甲醛溶液固定、脱水、包埋、HE染色，在显微镜下对肺组织进行观察。记录视野内肺内皮、肺上皮阳性染色细胞数和细胞总数，计算凋亡指数（AI）=阳性细胞数/总细胞数×100%。（2）血清HPA、MMP-9、HS和Syndecan-1含量检测。处死大鼠前，取大鼠血1 ml，4000 r/min离心15 min，取血清置于-80 ℃冰箱备用。HPA、MMP-9、HS和Syndecan-1检测方法参照大鼠HPA、MMP-9、HS、Syndecan-l（sCD138） ELISA试剂盒说明书。 　　1.4 统计学处理 　　本研究数据采用SPSS 17.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（x±s）表示，采用单因素方差分析进行统计