病生实验设计3.doc

研究题：Na+通道极化阻滞停搏对大鼠离体缺血-再灌注损伤的保护作用 理论依据：病理生理学 P156 临床心脏手术中常要应用停搏液使心脏停搏，以便手术操作，避免心肌缺血再灌注损伤的发生便成为一个不得不考虑的问题。 缺血再灌注导致钙超载可能是由于Na+-Ca2+交换异常所致——缺血时ATP生成减少，导致钠泵活性降低，细胞内Na+含量明显升高。再灌注时缺血细胞重新获得氧和营养物质供应，细胞内高Na+除激活Na+-Ca2+交换蛋白，以反向转运的方式加速Na+向细胞外转运，同时将大量Ca2+运入胞质，从而导致钙超载引起细胞损伤 由此我们想到：若直接应用Na+通道阻滞剂使心肌停搏，则缺血期细胞外Na+无法内流，无法导致细胞内Na+含量明显增高，进而避免钙超载的发生。 而临床外科常用长期以来将STH去极化停搏液作为心脏保护的“金标准”。随着心肌缺血-再灌注损伤机制的阐明，人们发现去极化停搏的方法有可能对缺血心肌造成不利影响，高钾去极化停搏液可使心肌细胞内出现Na+超载，进而诱发Ca2+超载，造成心肌损伤。 两种停搏方式原理： 普通晶体心脏停搏液（常用STH-2）停搏原理：以高浓度K+灌注心肌，使心脏停搏于舒张期，又称去极化停搏。 Na+通道阻滞剂停搏原理：以Na+通道阻滞剂灌注心肌，停搏时心肌细胞在膜电位接近静息电位的极化状态，防止Na+超载，降低能量消耗，减轻Ca2+超载，使心脏得到保护。 研究现状：自上世纪50年代起，在心血管外科术中应用心脏停搏液使心脏达到电机械停搏状态，不仅可获得清晰的术野，有利于术者操作，更重要的是可减轻心肌缺血-再灌注损伤。此后，心脏停搏液与心肌缺血再灌注损伤一直是人们研究的热点。目前，心脏停搏液已发展至800多种，并成为心血管外科手术中最常用的重要的心肌保护措施之一。心脏停搏液的种类： 1 冷晶体停搏液 冷晶体心脏停搏液是以含高浓度钾停搏液灌注心肌，使心脏停搏于舒张期，心肌电-机械活动静止。同时冷晶体停搏液要求低温，灌注后使心脏完全处于低温，可降低心肌组织在缺血期间的代谢率和氧耗量，心肌缺血耐受能力增强。 2 HTK液 临床应用的组氨酸-色氨酸- 酮戊二酸(Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate, HTK)停搏液又称Bretschneider液，是一种以细胞内液电解质为基础的心脏停搏液，是依靠低钠微钙的平衡作用使心脏停搏。 3 超极化停搏液 超极化停搏(Hyper-polarized cardiac arrest)是用ATP敏感的K+通道开放剂、Na+通道阻滞剂等使K+通道在静息电位时开放，细胞内钾溢出，跨膜电位差减小，避免钙内流，使动作电位不能形成，从而使心肌自然静息于超极化停搏状态。超极化停搏能减少离子泵启动时对ATP的需求，减少细胞内钙离子，减轻钙超载引起的心肌缺血再灌注损伤，研究显示[15、16]，对心功能恢复优于去极化心脏停搏液。 4 冷含血停搏液 冷含血停搏液(cold blood cardioplegia)是温血和晶体停搏液按4∶1比例混合后降温至4℃配置而成。与单纯晶体停搏液相比，含血停搏液可使心脏停搏于有氧环境，使无氧酵解降低;氧合血停搏液含有葡萄糖等营养物质，能为心肌提供丰富的代谢底物[20];血中蛋白成分具有胶体渗透压，能有效预防心肌水肿，并补充缓冲物质;避免大量灌注晶体停搏液造成的血液稀释和机体内水超负荷及组织水肿;对缺氧发作的心脏有保护其收缩及舒张功能。 5 冷自体血停搏液 近年来，有学者提出应用自体静脉血经紫外线照射充氧( ultraviolet blood irradiation and oxygenation,UBIO)后配置成心脏停搏液。舒义竹、向道康等[24]研究证实，UBIO心脏停搏液能减少心肌酶渗出，增加心肌ATP储备，降低心肌损伤标志物的水平，具有较好的心肌保护作用。张青等[25]在婴幼儿心脏手术中于体外循环前自主动脉抽取动脉血配制成冷自体血心脏停搏液(cold autologous blood cardioplegia)，研究显示，其可降低心肌细胞氧自由基的产生，对婴幼儿心肌的有良好保护效果 6 温血停搏液 1982年，Rosenkeane提出应用常温(35～37℃) 含血停搏液(warm blood cardioplegia)持续灌注心脏，其理论基础在于心电-机械活动完全停止时心肌能量代谢降低90%，不需再用低温的方式即可使心肌能量消耗明显下降，从而获得满意的心肌保护效果。研究显示，常温含血停搏液相对于低温停搏液具有一定的心肌保护优势[30]。Minatoya等[31]比较了温血停搏液和冷血停搏液的心肌保护效果，发现温血组在术后的心脏指数明显高于冷血组，所用的正性肌力药物亦明显少于冷血组。Mehlhorn 等[32]发