运用人多潜能干细胞研究SOX10在先天性巨结肠症中发病机制.docVIP

运用人多潜能干细胞研究SOX10在先天性巨结肠症中发病机制 　　【摘要】 目的：运用人多潜能干细胞研究SOX10在先天性巨结肠症（HD）中的发病机制。方法：选择2014年1月-2015年12月，17例HD患儿作为病例组；与性别、年龄配对的17例非巨结肠手术患儿作为对照组，收集术中切除肠段，提取RNA并检测SOX10表达水平。将人多潜能干细胞定向分化为神经崤细胞，构建SOX10 shRNA慢病毒质粒，转入SOX10 shRNA慢病毒质粒，检测SOX10基因表达下调后，导入SOX10，再次检测SOX10基因表达，与对照组相比上调后，观察神经崤细胞迁移能力。结果：病例组标本检测，痉挛段、移行段和扩张段SOX10/β-actni灰度值分别为（0.9254±0.2758）、（1.3082±0.0546）、（1.3147±0.0613），对照组为（1.3178±0.0715），痉挛段与正常肠段SOX10/β-actni灰度值比较差异有统计学意义（P0.05）。25μL SOX10 shRNA慢病毒质粒下调SOX10表达下调率为63.7%。加入促迁移因子laminin前，荧光显微镜下随机视野计数结果显示，神经嵴干细胞数量数为28%。加入后神经嵴干细胞数量数为65%，差异有统计学意义（ 字2=12.829，P0.05）。结论：SOX10在正常结肠组织中高表达，但在HD结肠痉挛段呈低表达，同时SOX10表达失调参与HD的发生和发展，运用人多潜能干细胞试验证实下调SOX10可导致神经崤细胞迁移障碍，而促迁移因子laminin可恢复其迁移能力。 　　【关键词】 人多潜能干细胞； SOX10； 先天性巨结肠症； 发病机制 　　【Abstract】 Objective：To apply SOX10 human pluripotent stem cell research in the pathogenesis of hirschsprung’s disease（HD）.Method：From January 2014 to December 2015，17 cases children with HD as a group.By gender，age，matching of 17 cases of children with hirschsprung surgery as the control group， collection of excision of the intestine， extracting RNA and detecting SOX10 expression level.Human pluripotent stem cells，directional differentiation into neural xiaohan cells， build SOX10 shRNA lentivirus plasmid，into SOX10 shRNA lentivirus plasmid，detect SOX10 gene expression after the downgrade，import SOX10，again to detect SOX10 gene expression，compared with the control group after raising，ability to observe neural xiaohan cell migration.Result：CPT samples，spas m，transitional period and the expansion period of SOX10/beta actni grey value were respectively （0.9254±0.2758），（1.3082±0.0546），（1.3147±0.0613） and the control group was （1.3178±0.0715），convulsion period and normal bowel SOX10/beta actni grey value comparison difference was statistically significant（P0.05）.25 μL SOX10 shRNA lentivirus cut SOX10 expression plasmid cut rate was 63.7%.Before joining migration factors laminin，fluorescence microscope counting random field of vision，according to the results of neural