采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本流感病毒检出观察.docVIP

采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本流感病毒检出观察 　　[摘要] 目的 探讨采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本的流感病毒检出情况。方法 分析我中心2013年12月～2014年3月收集的流感指征患者193例作为研究对象，分别采集鼻拭子和咽拭子各1份，分别通过荧光PCR、细胞培养对流感病毒进行检测。 结果 鼻拭子对B亚型流感病毒敏感性较高，通过PCR和MDCK细胞接种中阳性率高于咽拭子（P0.05）。 结论 流感病毒监测过程中，根据当地流行主要流感病毒亚型来选择鼻拭子和咽拭子，对于提高流感病毒检出率具有很重要的意义。 　　[关键词] 荧光PCR；细胞培养；流感病毒；检出 　　[中图分类号] R511.7 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）15-147-03 　　[Abstract] Objective To explore influenza virus detection of different specimen for influenza-like cases by polymerase chain reaction （PCR） and cell culture. Methods 193 patients with influenza indications who were admitted to our center from December 2013 to March 2014 were selected as research objects. One nose swab and one throat swab were respectively collected and influenza virus was respectively detected by fluorescent PCR and cell culture. Results Nose swab was more sensitive to B subtype influenza virus and positive rate of nose swab by PCR and Madin Darby canine kidney （MDCK） cell culture was higher than that of the throat swab（P0.05）. Conclusion In influenza virus detection process， choosing nose swab or throat swab according to local prevalent influenza virus subtype has important significance in improving detection rate of influenza virus. 　　[Key words] Fluorescent PCR； Cell culture； Influenza virus； Detection 　　流感是目前常见的传染性疾病，每年在全世界范围内有大量的流行性感冒发生，其也会造成一定数量的死亡[1-2]。随着我国流感监测网络的逐步完善，对于流感样标本的采集数量和种类也明显增多[3-4]。本研究通过对我中心收集的193例流感病例情况进行分析，拟探讨采用PCR和细胞培养方法比较流感样病例不同标本的流感病毒检出情况，现将结果汇报如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取我中心2013年12月～2014年3月收集的流感指征患者193例作为研究对象，患者发热≥38℃，伴有不同程度的咳嗽或者咽喉痛等急性呼吸道感染症状。采用Copan公司生产的绒毛拭子对患者标本进行采集。 　　1.2 方法 　　采用绒毛拭子分别采集鼻拭子和咽拭子各1份，按照《全国流感监测技术指南》中的操作步骤进行，拭子采集完毕后放入15mL螺口管内，其中装有Eagels采样液，4℃保存，48h内进行检测。标本到达实验室进行登记，保证标本各项记录资料完整，对标本振荡15s，促使绒毛拭子在管壁内进行反复性的挤压，然后从中取出，分为3份。一份采用荧光PCR检测，一份采用MDCK细胞接种，第三份保存进行复核。 　　荧光PCR：通过梅里埃自动核酸抽取仪进行核酸抽提，采用200μL样品抽提从而获得60μL核酸，通过甲乙型流感病毒RNA检测试剂盒进行检测，甲型流感病毒标本继续采用季节性H1亚型流感病毒RNA、季节性H3亚型流感病毒RNA和甲型H1N1流感病毒RNA进行亚型检测。操作步骤严格按照试剂盒操作规程进行。Ct值≤35为阳性判定标准，如果阴阳性对照有偏差，进行重复检测。 　　MDCK细胞接