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长白山区野生香薷中挥发油提取及其抑菌性研究 　　摘要：采用水蒸气蒸馏法对长白山野生香薷中挥发油进行提取，再用药敏纸片法和二倍稀释法进行体外抑菌试验，研究其抑菌活性。 结果表明长白山野生香薷挥发油对细菌和真菌均有一定的抑菌效果。结果为进一步开发长白山野生香薷的药用价值提供了良好的数据基础。 　　 关键词：野生香薷；水蒸气蒸馏法；挥发油；抑菌性 　　 基金项目：吉林农业科技学院大学生创新项目（吉农院合字［2013］第067号）；吉林农业科技学院微生物重点学科项目（吉农院合字［2013］第X005号） 　　中图分类号：Q949 文献标识码：A 文章编号： 1674-0432（2014）-12-20-2 　　 香薷（mosla herb）属唇形科二年生草本植物,散发香气，又叫香菜，是东北农村传统的食物调料，其香味极浓，可增强口感；香薷主要分布于江西、陕西、山东、甘肃和吉林等地，在我国资源丰富，其中以江西产量大，品质佳，又称“江香薷”。目前主要是对“江香薷”中的黄酮、多糖和挥发油进行研究，而对长白山区的野生香薷的挥发油的相关研究却鲜见报道。据文献报道挥发油具有镇痛、抗菌、抗病毒、解热、缓解肠痉挛等功效 [1，2]。为了更好地研究、了解、利用长白山野生香薷，本论文将以长白山野生香薷为原料，采用水蒸汽蒸馏技术对其中的挥发油进行提取，并利用药敏纸片法和二倍稀释法对其挥发油的抑菌性进行研究，为长白山区野生香薷的药用价值的开发提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1原料与试剂 长白山野生香薷，采自吉林省长白山区内，经专家鉴定为长白山野生香薷，处理为干品，通过粉碎机制成干燥的香薷粉末。NaCl、无水 Na2SO4、乙醚为分析纯。 　　1.1.2菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、霉菌、青霉、黑曲霉、酵母以上菌种均由吉林农业科技学院微生物实验室提供。 　　1.1.3培养基采用牛肉膏蛋白胨培养基进行细菌培养。蛋白胨10.0克，牛肉浸膏5.0克，NaCl 5.0克，琼脂20.0克， pH 7.2，121 ℃灭菌20分钟。 　　1.1.4仪器与设备 挥发油提取器、FWl00型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）、LS-B50L型立式压力蒸汽灭菌器（上海华线医用核子仪器有限公司）、ZD-85气浴恒温振荡培养箱（常州翔天实验仪器厂）、AIR-TECH型超净工作台（苏州净化设备有限公司）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1水蒸气蒸馏法提取香薷挥发油 参考水蒸气蒸馏法提取挥发油的相关文献[3，4]，准确称取100.00克干燥野生香薷粉末，置于挥发油提取器内，连接水蒸气蒸馏装置后开始提取，收集馏出液，向馏出液中加入NaCl，静置后用乙醚萃取（20毫升×3次），合并萃取液，向萃取液中加入适量无水Na2SO4后，低温干燥24小时后再进行过滤，旋蒸回收乙醚，收集挥发油并计算挥发油得率，置于冰箱内备用。 　　1.2.2菌悬液的制备 将供试的细菌和真菌的菌种接种到斜面培养基上活化，用无菌接种环从斜面上挑取各供试菌种，将其接种到液体培养基中，细菌菌种在温度37℃、转速220转/分的条件下恒温震荡培养24小时，真菌菌种在温度28℃、转速220转/分的条件下恒温震荡培养48小时，用无菌蒸馏水将供试菌进行稀释。采用细胞计数法，具体计算公式如下：1mL菌液中的总菌数/个=平均每个小格的总菌数×25×16×1000×稀释倍数，分别调整至终浓度为106CFU/mL的菌悬液和104CFU/mL的孢子悬液，备用。 　　1.2.3药敏纸片法测定抑菌圈 用无水乙醇将香薷挥发油母液分别稀释成25毫克/毫升、15毫克/毫升和5毫克/毫升，置于3支不同的试管内，备用。 　　 打孔器将干净的滤纸制成直径为6毫米的小圆纸片，高温蒸汽灭菌后，置于25毫克/毫升、15毫克/毫升和5毫克/毫升这3种不同质量浓度的挥发油中浸泡2小时，再用无菌镊子移至无菌平皿中，分别加入2~3滴这3种不同浓度的香薷挥发油，放在干燥箱内烘干，制成饱和的药敏纸片。在超净工作台上，将灭菌后的固体培养基倒入无菌培养皿中，每皿15毫升。待冷却凝固后，用移液器吸取0.1毫升菌液至培养基平板上，用涂布器将菌液涂布均匀，然后正置于培养箱中培养1小时（细菌培养温度37℃，真菌培养温度28℃）。1小时后，将饱和的药敏纸片呈品字状贴于平皿上，并设无水乙醇滤纸片作为空白对照，然后放在恒温箱内倒置培养。细菌置于37℃的恒温箱中培养24小时后观察，测量并记录抑菌圈的直径；真菌置于28℃的恒温箱中培养48小时后观察，测量并记录抑菌圈的直径。每组实验重复2次，取平均值。 　　 以抑菌圈直径的大小为参考指标，根据抗菌物质抑菌圈试验测定结果的判定标准[5]，得出如下的结论：抑菌圈直径大于1