陈皮半夏对颈动脉硬化家兔血管细胞黏附分子1及基质金属蛋白酶9表达影响.docVIP

陈皮半夏对颈动脉硬化家兔血管细胞黏附分子1及基质金属蛋白酶9表达影响 　　摘要：目的 观察对药陈皮半夏对颈动脉粥样硬化家兔血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的干预作用，探讨抗动脉硬化的作用机制。方法 将25只雄性新西兰白兔随机分为正常组、模型组和中药大、中、小剂量组。正常组给予基础饲料喂饲，模型组和中药组予高脂饲料喂饲，并在喂饲1周后实施颈动脉内膜空气干燥术，术后中药组按10、8、6 mL/kg剂量予陈皮半夏煎剂灌胃，每日1次。4周后处死家兔，取每只家兔右侧颈动脉远端1 cm，固定后行HE染色，观察病理改变。应用免疫组化SABC法检测VCAM-1和MMP-9表达情况。结果 模型组血管壁泡沫细胞、平滑肌细胞和内皮细胞的胞浆中有VCAM-1和MMP-9强阳性表达，显著高于正常组（P0.01）。中药组细胞内VCAM-1和MMP-9阳性表达显著低于模型组（P0.01），且随剂量的增加，陈皮半夏煎剂对VCAM-1和MMP-9的抑制逐渐增强。结论 对药陈皮半夏可以有效抑制颈动脉硬化家兔VCAM-1和MMP-9的表达，提示其可能是通过抑制血管炎症反应、稳定斑块而发挥抗颈动脉硬化作用的。 　　关键词：陈皮；半夏；颈动脉硬化；血管细胞黏附分子-1；基质金属蛋白酶-9；兔 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.013 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）11-0034-03 　　颈动脉硬化是全身性动脉硬化的一部分，其病因尚未完全阐明。流行病学调查显示其主要危险因素有年龄、性别、吸烟、高血压、糖尿病及高血脂症等。目前学者普遍认为颈动脉硬化是由于致伤因素和血管反应之间复杂的相互作用的结果[1]。颈动脉硬化的形成悄无声息，但它是引起脑梗死的重要危险因素。严重颈动脉硬化者即使在药物的干预下，脑卒中的发生率仍为15%～20%[2]。颈动脉硬化形成过程中，血管细胞黏附分子-1 　　基金项目：国家自然科学基金81102624）；北京市科技新星项目（2008A090）；北京市中医药科技项目（JJ2009-037） 　　通讯作者：黄小波，E-mail：huangxiaobo@bjgn.org 　　（VCAM-1）介导的炎症反应和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）对动脉硬化斑块的稳定等起到了极其重要的作用[3-4]。本课题组前期研究中发现化痰法能有效抑制动脉硬化[5]，但由于中药复方对治疗动脉粥样硬化具有多途径、多靶点的特点。因此，我们将通过动物实验，进一步研究化痰法中常用对药陈皮半夏合用是否能通过干预VCAM-1和MMP-9的途径治疗颈动脉粥样硬化。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　雄性新西兰白兔，体质量2000～2200 g，购自北京开源兔业养殖场，合格证号：SCXK（京）2006-0005。 　　1.2 药物 　　陈皮、半夏按照1∶1配伍，蒸馏水泡2 h，常法煎煮2次，每次40 min，滤出，60 ℃恒温箱内24 h，水浴蒸发浓缩至100%，4 ℃储存备用。 　　1.3 分组与给药 　　新西兰白兔造模前以基础饲料适应性喂养1周，在稳定其血脂水平和代谢状况后，按照随机数字表法分为正常组、模型组及中药大、中、小剂量组，每组5只。正常组给予基础饲料喂饲，其余各组给予高脂饲料喂饲（2%胆固醇+2%猪油+96%基础饲料）。除正常组外，动物在喂饲1周后实施颈动脉内膜空气干燥术，术后中药大、中、小剂量组家兔按10、8、6 mL/kg剂量予陈皮半夏煎剂灌胃，每日1次，连续4周。所有动物均单笼喂饲，饮水不限，每日每只进食150 g饲料。 　　1.4 颈总动脉内膜空气干燥术 　　10%水合氯醛（剂量为5 mL/kg）灌肠后，颈部脱毛消毒；颈部正中纵行切口，钝性分离，暴露两侧颈总动脉，分离右侧颈总动脉，长度约2 cm；用动脉夹临时夹闭右侧颈总动脉近心端和远心端后用皮试针头于近心端夹闭外近刺入管腔，再在远心端刺破颈总动脉；将抽有生理盐水的注射器连接于皮试针头，用生理盐水灌洗血管腔，然后将医用氮气连接于皮试针头向夹闭段的颈总动脉行空气干燥术，以120 mL/min进行干燥，时间10 min；干燥术后拔出皮试针头，松开动脉夹，恢复右侧颈总动脉的血流，用棉签轻压伤口，待完全止血后去掉棉签，轻压2 min；待颈总动脉完全止血且血流通畅后用庆大霉素局部抗感染，并缝合皮肤。 　　1.5 HE染色观察颈动脉病理改变 　　干预4周后处死家兔，截取右侧颈动脉远端1 cm，中性缓冲福尔马林（pH 7.4）固定24 h后脱水，石蜡包埋固定，4 ?m厚连续切片，60～62 ℃烘箱（DHG-9140A型电热恒温箱）烤片