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DNA损伤的种类:碱基的脱落碱基(或核苷)的改变错误碱基掺入核苷酸的缺失或插入嘧啶碱基二聚体链的断裂DNA链的交联 DNA突变的类型 甲基化过程 甲基化指导的错配修复过程 嘧啶二聚体的产生 uvrABC核酸酶的作用机制 光复活 DNA紫外线损伤的光复合酶修复 甲基转移酶使O6-甲基鸟嘌呤脱甲基生成鸟嘌呤,防止G-T配对 4.4 重组修复(Recombination Repair) DNA的重组修复 一 限制-修饰现象 二 限制-修饰系统 三 限制修饰系统的生物学意义 细菌中三种不同类型的修饰-限制酶 1 防止外源DNA的入侵及对外源DNA的利用; 2 对自身DNA的保护; 3 Ⅱ类酶广泛应用于DNA重组技术。 5' GTT AAC 3' Hpa Ⅰ blunt end 3' CAA TTG 5' 5' G↓AATTC 3' EcoRⅠ 5’protruding end 3' CTTAA↑G 5' 5' A↓AGCTT 3' HindⅢ 5’protruding end 3' TTCGA↑A 5' 5' G↓GATCC 3' BamHⅠ 5’protruding end 3' CCTAG↑G 5' 5' C↓TGCAG 3' PstⅠ 3’protruding end 3' GACGT↑C 5' 限制修饰的意义: recognition sequence enzymes * * 第四章 DNA损伤修复 -T-C-G-G-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-C-G-A-C-A-T-G-C- 转换 -T-C-G-A-G-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-T-C-G-A-C-A-T-G-C- 插入 A -T-C-G-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-G-A-C-A-T-G-C- 缺失 T 野生型基因 -T-C-G-A-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-T-G-A-C-A-T-G-C- -T-C-G-T-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-A-G-A-C-A-T-G-C- 颠换 碱基对的置换(substitution) 移码突变 (framesshift mutation) 4.1 复制修复系统: 4.2 损伤修复系统: 4.3 限制修饰系统 修复机制 错配修复 切除修复,直接修复, 重组修复, SOS修复 4.1 错配修复——通过一个酶系统修复正在复制的DNA链中的错配碱基,即切除尚未甲基化的子代链上的错配碱基. 属于校对活性吗? 母链的识别?根据复制叉上DNA甲基化程度; 错配修复的甲基化依赖机制: ?Dam甲基化酶,使母链位于5’GATC序列中A的N6位甲基化,复制前完成,作为子链修正的依据; ? 子链甲基化在DNA复制之后进行; ?当子链中有错配碱基时,根据复制叉上DNA甲基化程度,修复系统在母链甲基化腺苷酸的上游鸟苷酸5’位置切除尚未甲基化的子链上的错配碱基,启动修复合成子链。 甲基化部位 5’ 切割部位 p.52 发现错配碱基 在水解ATP的作用下,MutS, MutL与碱基错配点的DNA双链结合 MutS-MutL在DNA双链上移动,发现甲基化DNA后由MutH切开非甲基化的子链 碱基错配修复过程示意图 嘧啶二聚体 的修复机制 切除修复 直接修复 重组修复 SOS修复 4.2 切除修复 一)碱基切除修复(Base Excision Repair,BER) 相关概念: Ap位点:糖苷水解酶识别改变了的碱基,把碱基从N-β-糖苷键处切下来,在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点,统称为AP位点。 Ap内切酶的作用: Ap内切酶切开受损伤的核 苷酸的磷酸二酯键,切除包括该 Ap 位点在内的一小段DNA. AP位点形成; Ap内切酶切开Ap位点附近的磷酸二酯键,除去包括Ap位点的一小段DNA; DNA Pol l 除去DNA链的损伤部分(5’--3’外切)并合成新链; 连接酶封闭。 碱基切除修复过程: AP位点 由AP磷酸内切酶将受损核甘酸的糖甘-磷酸键切开 。 DNA连接酶
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