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颈椎后纵韧带胶原和蛋白多糖含量变化在颈椎病发病机制中意义 　　许　勇　吴小涛　陈晓钢 　　[摘要]目的探讨颈椎后纵韧带胶原和蛋白多糖含量变化在颈椎病发病机制中的意义。方法收集脊髓型颈椎病患者下位颈椎后纵韧带15份作病例组，同年龄段正常下位颈椎后纵韧带10份作对照组。Weossner法测定两组总胶原含量，酶联免疫吸附法测定Ⅱ型胶原含量，间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化。Masson染色后对比观察后纵韧带的显微结构变化特点。结果 病例组总胶原和蛋白多糖含量均低于对照组，Ⅱ型胶原含量较对照组高，差异均有统计学意义(P0.05)。病理检查结果显示病例组弹力纤维、胶原纤维肿胀，排列紊乱。结论颈椎后纵韧带总胶原、Ⅱ型胶原和蛋白多糖代谢发生紊乱与颈椎病发生发展有密切关系。 　　[关键词]颈椎病；后纵韧带；胶原；蛋白多糖 　　 　　颈椎病是以颈椎间盘退变为主要病变基础，导致颈周围肌肉、关节继发性改变和相邻椎体退变增生，从而直接压迫神经血管，诱发与之相关临床症状和体征的疾病。后纵携带退变在颈椎病的发病因素中占重要地位。大量研究表明，颈椎后纵携带蜕变与基因、环境等多种因素有关。目前国内外在生物化学水平对椎间盘及黄韧带中胶原和蛋白多糖等物质的微量变化进行了大量研究，但对颈椎后纵韧带生物化学定量变化的研究鲜见。 　　本实验对颈椎病患者的颈椎后纵韧带总胶原、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量进行测定，并探讨其含量变化在颈椎病发病机制中的意义。 　　 　　1　资料和方法 　　 　　1.1　病例选择 　　(1)病例组。选取本院2005年10月至2006年5月收治中的15例脊髓型颈椎病手术患者的c4－c5或C5－C6颈椎后纵韧带，并去除明显骨化块部分。其中男9例，女6例，年龄47－63岁，平均54岁。颈椎病诊断根据临床症状、体征及常规x线、MRI检查结果。(2)对照组。取10份平素身体健康，生前无糖尿病史、颈肩痛病史及家族性颈椎病史，因车祸等意外死亡者的C4－C5和C5－C6颈椎后纵韧带。其中男6例，女4例，年龄45－60岁，平均52岁，在死亡后12h内取材。标本用生理盐水冲洗血迹，吸水纸吸干表面的水分，铝锡纸密封放入－80度冰箱储存备用。 　　 　　1.2　主要试剂和仪器 　　标准羟脯氨酸(Sigma，美国)，酶标器(Bio Red，美国)，Ⅱ型胶原酶联免疫测定试剂盒(TPI Inc，美国)，Masson三色试剂盒(福建迈新生物技术开发公司)。 　　 　　1.3　总胶原蛋白含量测定 　　采用Woessner方法测定羟脯氨酸，间接推算组织中总胶原蛋白含量。具体方法如下：标本脱水、脱脂、烘干、称重，加100倍样本量的盐酸(6mol?L-1)在110度分解24h；旋转蒸发器去除盐酸，双蒸水溶解残留物；加氯胺T溶液室温静置20min，加过氯酸溶液室温静置5min，加对苯胺基苯甲醛溶液置60度温箱20min，取出待冷却；在波长560nm处测定吸光值，通过羟脯氨酸标准曲线计算出待测液内的羟脯氨酸浓度，以此推算组织总胶原蛋白含量。 　　 　　1.4　Ⅱ型胶原含量的测定 　　标本称重，脱水、脱脂，0.4mol?L-1乙酸浸泡过夜，在冰浴下制备成匀浆，以盐析法提取胶原。ELISA法测定Ⅱ型胶原，按试剂盒说明书的步骤进行，在波长450nm下测定Ⅱ型胶原的浓度，计算含量。 　　 　　1.5　蛋白多糖含量测定 　　采用间苯三酚分光光度法测定光密度值，转换为量值作蛋白多糖含量的测定。 　　 　　1.6　组织病理学观察 　　标本用10％福尔马林浸泡过夜，脱水、透明、浸蜡、切片，Masson染色，光镜观察。 　　 　　1.7　统计学处理 　　结果表示，数据用SPSSl3.0统计软件进行分析，组间差异比较应用两组均数的￡检验，P0.05表示差异有统计学意义。 　　 　　2 结果 　　 　　2.1　标本大体观察 　　病例组后纵韧带质地变硬、弹性减低、色泽发白，部分可触及质地硬的骨化块。对照组后纵韧带质地柔软湿润、富有弹性、有光泽。 　　 　　2.2　羟脯氨酸含量 　　病例组羟脯氨酸含量为(39.47±0.85)mg?g-1，总胶原蛋白含量为(394.7l±8.48)mg?g-1；对照组羟脯氢酸含量为(49.96±1.83)mg?g-1，总胶原蛋白含量为(499.58±18.31)mg?g-1。经检验，两组间羟脯氨酸含量和总胶原蛋白含量差异均有统计学意义(P0.05)。 　　 　　2.3Ⅱ型胶原含量 　　病例组Ⅱ型胶原含量为(112.08±17.98)mg?g-1，对照组Ⅱ型胶原含量为(92.43±16.25)mg?g-1。经检验，两者差异有统计学意义(P0.05)。 　　 　　2.4　蛋白多糖含量 　　病