饲粮纤维水平对初产母兔瘦素分泌及其基因表达影响.docVIP

饲粮纤维水平对初产母兔瘦素分泌及其基因表达影响 　　doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2016.10.078 　　摘要：为研究饲粮不同纤维水平对初产母兔血清中瘦素含量以及卵巢组织中OB、OB-R基因表达的影响，选取165日龄的新西兰青年母兔240只，随机分为4个处理，分别为12%、14%、16%、18%纤维水平添加组，每个处理设5个重复，每个重复12只，每个处理共60只。结果显示，从配种到分娩，各处理组的母兔血清中瘦素含量均呈上升趋势。不同处理组相比较，母兔血清中瘦素含量存在显著差异，其中16%添加组的母兔血清瘦素含量最高。基因表达研究表明，16%添加组的母兔卵巢中，OB、OB-R基因的表达量显著高于其他各试验组。饲粮不同纤维水平对初产母兔瘦素分泌影响显著，初产母兔饲粮中纤维的适宜添加水平为16%。 　　关键词：纤维；母兔；OB基因；OB-R基因；卵巢；基因表达 　　中图分类号： S829.15文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）10-0281-03 　　收稿日期：2016-04-08 　　基金项目：四川省公益性科研院所基本科研业务费项目（编号：SASA2015A10）；四川省“十二五”畜禽育种攻关项目（编号：2011NZ0099）；公益性行业（农业）科研专项（编号：201303143-5）；国家兔产业技术体系（编号：CARS-44-B-4）；动物遗传育种四川省重点实验室运行补助项目。 　　作者简介：邝良德（1983―），男，湖南郴州人，硕士，助理研究员，主要从事家兔遗传育种及饲养研究。E-mail：happyboy5851258@163.com。 　　通信作者：任永军，硕士，助理研究员，主要从事家兔饲养及疫病防控研究。E-mail：360167513@。粗纤维泛指植物性来源纤维成分，包括纤维素、半纤维素、果胶、植物胶、黏多糖、木质素等，主要存在于植物的细胞壁中。国内外研究表明，粗纤维是家兔最重要的营养素之一，对家兔具有特殊的生理作用，在构成合理日粮结构、维持家兔正常生理功能、初产母兔繁殖及胚胎成活率等方面起着极为重要的作用。瘦素（leptin）是肥胖基因（obesegene，ob）编码的产物，是一种分泌性蛋白质类激素。OB基因是1条含167个氨基酸密码的DNA序列，包含有2个外显子、1个内含子。Hindlet等研究发现，缺陷ob/ob（缺乏功能性瘦素）雌鼠不仅表现出肥胖，还出现生殖功能障碍，持续注射外源性瘦素后可恢复生殖功能，由此证明瘦素与生殖功能有关[1-2]。瘦素受体由db基因（diabetes gene）编码，为高度特异的跨膜蛋白质，与瘦素具有高度亲和力。最初认为瘦素只在白色脂肪组织中表达，之后研究发现，瘦素在下丘脑、垂体、肺、胃底部上皮、骨骼肌、卵巢、子宫内膜、合体滋养层细胞、乳腺上皮等均有表达，且在卵巢、子宫内膜中与瘦素受体同时表达[3-4]。 　　瘦素及其受体在下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴的多处表达，表明瘦素对生殖的调节是通过旁分泌或内分泌方式对HPG轴不同水平进行复杂的网络式调节，从而对哺乳动物的繁殖机能发挥重要作用[5-7]。适宜的粗纤维水平对家兔繁殖生产具有重要意义；因此，通过深入研究不同粗纤维水平对初产母兔瘦素分泌及其基因表达的影响，为降低母兔淘汰率、死亡率，综合提高母兔繁殖性能提供前提条件和基础。 　　1材料与方法 　　1.1试验设计及母兔饲养管理 　　选择相同日龄（165日龄）的新西兰青年母兔240只，随机分为4个处理，每个处理设5个重复，每个重复12只，每个处理共60只。试验期为母兔165日龄至第1胎分娩，4个处理分别饲喂12%、14%、16%、18%水平纤维的日粮，所有日粮均按美国NRC肉兔饲养标准配制。分别于母兔配种当天、妊娠21 d、分娩当天从每个重复中选择4只母兔，每个处理共20只，进行耳缘静脉采血，分离血清并于-20 ℃保存待测。同时，在以上日龄的每个重复中选择1只母兔，每个处理5只，共计60只，进行屠宰并采集卵巢组织样品，于-80 ℃保存，用于瘦素及瘦素受体mRNA表达量的测定。 　　1.2试验日粮及营养水平 　　按照美国NRC肉兔饲养标准配制全价料，试验日粮组成及营养成分见表1。在日粮中添加苜蓿草粉，将日粮粗纤维水平分别调整为12%、14%、16%、18%，即试验1、2、3、4组。所有试验母兔均饲养在同一兔舍内，自由采食、自动饮水。 　　1.3主要仪器及试剂 　　Biowave DNA型核酸蛋白检测仪，Power Pac 3000型电泳仪，岛津UV2600型紫外分光光度计，Polytron PT1200E型电动匀浆器，Bio-rad iCycler iQ型定量PCR仪，日立CR22g型高速冷冻离心机，Ve