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香菇多糖化学结构与抗氧化活性分析 　　摘要：对香菇多糖（Lentinus edodes polysaccharides，LPS）经过离子交换柱层析和凝胶柱层析法得到的2种组分（LPS-1和LPS-2）的化学结构特征进行分析，旨在为香菇多糖的构效关系研究提供依据。采用高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱（GC）、红外光谱（IR）分析等手段对其化学结构特征进行解析，并对其抗氧化活性进行分析。构成糖分析结果显示，LPS-1单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，其物质量之比为 1.52 ∶2.96 ∶2.91 ∶0.78 ∶1.00 ∶1.35；LPS-2的单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖，其物质量之比为2.91 ∶1.00 ∶1.10 ∶0.20 ∶0.50。LPS-1和LPS-2均有较强的抗氧化活性，LPS-2更为显著。结果表明，香菇多糖主要是阿拉伯糖和鼠李糖组成的吡喃型多糖，有较强的抗氧化活性。 　　关键词：香菇；多糖；化学结构；抗氧化 　　中图分类号： R284.1 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）11-0305-04 　　香菇（Lentinus edodes）别称花菇、香菌、香蕈、冬菇、香菰，属真菌门（Eumycophyta）侧耳科（Pleurotaceae）香菇属（Lentinus），是世界第二大食用菌。香菇口味鲜美、营养丰富、富含多种生物活性物质，如多糖、维生素、蛋白质、多元酚、朴菇素、膳食纤维等。香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，作为一种免疫促进剂，已引起人们广泛的兴趣。香菇多糖的生物学功能主要有以下几方面：抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、免疫调节、抗炎、保肝护肝和降血糖等[1-2]。有关香菇多糖的药理研究，特别是结构方面的研究已引起国内外学者的高度关注，并成为多糖领域的研究热点。本研究对香菇多糖（Lentinus edodes polysaccharides，LPS）通过DEAE-52纤维素柱和 G-100 葡聚糖多糖进行分离纯化，分别研究了LPS-1和LPS-2的分子量、单糖组成、键型和抗氧化活性，为香菇多糖的研究开发及利用提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与仪器 　　1.1.1 试验材料 本研究所用的香菇多糖是以山东荣丰食用菌有限公司生产的香菇为材料，经过热水浸提、乙醇沉淀、透析等方法分离而成。 　　1.1.2 试验试剂 　　30%H2O2（天津市凯通化学试剂有限公司）；95%乙醇（天津市百世化工有限公司）；DPPH（Sigma公司）；DEAE-52纤维素（Sigma公司）；葡聚糖G-100（Sigma公司）；苯酚（天津市天大化学试剂厂）；浓硫酸（淄博化学试剂厂有限公司）；浓盐酸（淄博化学试剂厂有限公司）；三氯乙酸（天津大茂化学试剂厂）。 　　1.1.3 试验仪器 　　752-N紫外可见分光光度计（上海精宏实验设备有限公司）；GC2010气相色谱仪（日本岛津公司）；TDL-5-A型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；Nicolet380傅立叶变换红外光谱仪（美国热电集团）；DK-S24型恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；LXJ-68-02型离心机（北京医疗仪器修理厂）；DZF-6021型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。 　　1.2 多糖的提取 　　利用水提醇沉法提取香菇多糖。 　　1.3 成分含量测定 　　总糖含量采用苯酚-硫酸法[3]测定。 　　1.4 多糖的凝胶柱层析 　　首先采用DEAE-纤维素离子交换柱对多糖进行分离纯化，用浓度梯度为0.2、0.5、1.0 mol/L的NaCl溶液洗脱，洗脱速度控制在1 mL/min，每个洗脱梯度收集25管，每管收集2 mL，利用苯酚-硫酸法测定收集到的多糖溶液浓度，绘制洗脱曲线。然后用葡聚糖G-100凝胶柱对多糖进行进一步的分离纯化和纯度鉴定[4]。用0.1 mol/L NaCl溶液充分平衡层析柱后，用蒸馏水作为洗脱剂，洗脱速度控制在 0.1 mL/min，每管收集2 mL，同样利用硫酸-苯酚法对收集到的多糖溶液浓度进行测定，绘制洗脱曲线。 　　1.5 多糖的分子量测定 　　采用高效液相色谱法（HPLC）对多糖的分子量进行测定[5]。用高效液相色谱仪（1260型，美国安捷伦科技有限公司），SHODEX SB-806 HQ色?V柱Column（8.0 mm×300 mm）及示差折光检测器测定。流动相为0.2 mol/L NaCl溶液，进样量为100 μL，流速为0.5 mL/min，柱温保持 5 ℃。标准品及样品质量浓度均为2 mg/mL。用葡聚糖系列样品作为标准品，以lg Mw（分子质量对数）对ET（保留时间）绘制标准曲线，得线性回